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1、葡萄CIPK基因家族的鑒定表達(dá)分析路志浩霍建強(qiáng)馬鉉胡煒毛娟甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院摘要：以水稻、玉米、擬南芥中己知CIPK基因注冊序列為基礎(chǔ)，從葡萄基因組數(shù)據(jù)庫中電子克隆出16條CIPK基因。對其理化性質(zhì)分析表明，除VvCTPKIO編碼的251個氨基酸數(shù)目外，其余氨基酸數(shù)目基本穩(wěn)定為300470o整個CIPK家族的理論等電點為6驚基因結(jié)構(gòu)分析表明,VvCIPKOKVvCIPK03、VvCIPK04、VvCIPK08、VvCIPK09、VvClPK13包含外顯子數(shù)都大于10;VvCIPK02、VvCIPK05、VvCIPK06、VvCIPK
2、07>VvCIPKIO.VvCIPKIKVvCIPK12、VvCIPK14、VvCIPK15、VvCIPK16包含外顯子數(shù)都小于7。聚類分析表明，CIPK基因被分為4個亞族，且在每一個亞族屮都包含葡萄和擬南芥的CIPK基因家族成員，說明它們具有很高的同源性。對CIPK蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)分析表明，葡萄CIPK基因家族所編碼的蛋白質(zhì)均以a-螺旋和不規(guī)則卷曲為主，而B-轉(zhuǎn)角最少。亞細(xì)胞定位后發(fā)現(xiàn)，VvCIPK基因在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)最多。對葡萄CIPK基因家族上游2kb區(qū)域順式作用元件分析表明，VvCTPK13對于ABA和脫水脅迫的響應(yīng)最為明顯，葡
3、萄CIPK基因家族對于MYB轉(zhuǎn)錄因子和WRKY轉(zhuǎn)錄因子均有響應(yīng)。熒光定量分析表明，VvCIPK15在根屮表達(dá)量最多，在莖中表達(dá)量最少;在不同處理下該基因表達(dá)差異性顯著。其中，受PEG、ABA、NaCl誘導(dǎo)后呈明顯上調(diào)表達(dá)，其表達(dá)量依次為PEG>NaCl>ABAo同時該基因在受到高、低溫脅迫時表達(dá)量也有明顯上調(diào)，9個處理中只有在山梨糖中呈下調(diào)表達(dá)。推測該基因能夠參與調(diào)控干旱、鹽堿、低溫等逆境過程。關(guān)鍵詞：葡萄;CIPK家族;基因克隆;生物信息學(xué)分析;實時定量PCR;作者簡介：路志浩，男，在讀本科生，研究方向為果樹生物技術(shù)。E-mail:
4、1790665627@qq.com作者簡介：毛娟，女，博士，副教授，研究方向為果樹生物技術(shù)。E-mai1:maojuan@gsau.cdu.cn收稿日期：2016-06-08基金：廿肅農(nóng)業(yè)大學(xué)國家級大學(xué)生科技創(chuàng)新項目(201510733005)Genome-wideIdentificationandExpressionAnalysisoftheCIPKGeneFamilyinGrapeLUZhihaoHUOJianqiangMAYuHUWeiMAOJuanCollegeofHorticulture,GansuAgriculturalU
5、niversity;Abstract：Thisworkwasbasedonknowngenesofrice,maizeandarabidopsis.Atotalof16membersofthisfamilywereidentifiedingrapegenome.Analyzingtheirphysicalandchemicalproperticsrevealedallofthegenesofaminoacidnumberdistributeon300-470butVvCIPKIOwhichhas251aminoacid.Theoret
6、icalisoelectricpointofthewholegenesdistributedon6-9.AnalyzingstructureofgenesindicatedthatapartofexonofVvCIPKweremorethan10(VvCIPKOl,VvCIPK03,VvCIPK04,VvCIPKO&VvCIPK09andVvCIPK13),theotherswerelessthan7(VvCIPK02,VvCIPKOS,VvCIPK06,VvClPK07,VvCIPKIO,VvClPKll,VvClPK12,VvCl
7、PK14,VvClPK15andVvCIPK16).Phylogeneticanalysisindicatedthatalltheproteinsfellintofourmajorclusters,andeveryclustercontainedapartofgenesofgrapeandarabidopsis-Itindicatedhighhomologyrelationshipofthosegenes.AnalyzingthesecondarystructureofVvCIPKproteinsequenceindicatedtha
8、tmostratiowerealphahelixandirregularcurly,theratioofbetaanglewastheleast.Thewholegeneschiefexpressedincytoplas
