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《諾卡氏菌細(xì)胞壁肽聚糖粗提物對(duì)烏鱧免疫活性的影響【開題報(bào)告】》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、畢業(yè)論文開題報(bào)告水產(chǎn)養(yǎng)殖諾卡氏菌細(xì)胞壁肽聚糖粗提物對(duì)烏鱧免疫活性的影響一、選題的背景與意義烏鱧（Ophicephalusargus），亦稱黑魚，屬鱸形目，攀鱸亞目，鱧科，鱧屬，體呈烏黑色，細(xì)長(zhǎng)，前部圓筒狀，后部側(cè)扁，由背至腹顏色逐漸變淺，圓鱗。烏鱧分布極廣，除西部高原地區(qū)外，從黑龍江至海南的河川、湖泊、水庫、池塘等各種類型的水體皆產(chǎn)此魚，國(guó)外產(chǎn)于朝鮮西、南部。烏鱧肉富含蛋白質(zhì)、脂肪、18種氨基酸等，還含有人體必需的鈣、磷、鐵及多種維生素，營(yíng)養(yǎng)豐富、肉味甘性溫且骨刺少，有補(bǔ)脾、利水的藥用功能，深受群眾的歡迎。烏鱧是一種適應(yīng)性強(qiáng)、對(duì)不良水溫、水
2、質(zhì)及缺氧條件有較強(qiáng)耐受力的魚類，在江河湖塘等自然環(huán)境中很少發(fā)病。但隨著烏鱧人工高密度養(yǎng)殖的發(fā)展，烏鱧各種疾病頻頻發(fā)生，特別是水霉病、腐皮病、腹水病、爛鰓病危害嚴(yán)重，諾卡氏菌病也在近幾年流行起來，造成了很嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。諾卡氏菌（Nocardia）為革蘭氏陽性菌，好氧，分類上屬細(xì)菌域，厚壁菌門，放線菌綱，放線菌目，諾卡氏菌科。菌體呈長(zhǎng)或短桿狀,或細(xì)長(zhǎng)分枝狀，常斷裂成桿狀至球狀體，基絲發(fā)達(dá)，呈分枝狀，氣絲較少。魚類諾卡氏菌病于1963年在全球首次報(bào)告，確認(rèn)于阿根廷熱帶養(yǎng)殖的虹彩脂魚（Hyphessobryconinnesi）（杜佳根2007）。
3、隨后此病又陸續(xù)發(fā)生在虹鱒（Oncorhynchusmykiss）、黃尾鰤（Seriolalalandi）、烏鱧、大西洋牡蠣（Crassostreagigas）、大口鱸（Micropterussalmoides）和海鱸（Lateolabraxjaponicus）等水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中，曾影響日本、美國(guó)、澳大利亞、加拿大等地的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，造成很大經(jīng)濟(jì)損失（袁思平2006）。該病曾是日本水產(chǎn)養(yǎng)殖中最主要的水產(chǎn)動(dòng)物疾病之一,也是大西洋牡蠣養(yǎng)殖的主要疾病。而該病近年來對(duì)我國(guó)臺(tái)灣水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)也產(chǎn)生了較大影響，先后在烏鱧、大口鱸和海鱸等養(yǎng)殖魚類中發(fā)生此病。我國(guó)大
4、陸是2006年首次在養(yǎng)殖大黃魚中發(fā)現(xiàn)諾卡氏菌病（王國(guó)良2006）。肽聚糖(peptidoglycan)又稱粘肽、胞壁質(zhì)或粘質(zhì)復(fù)合物，由雙糖單位，四肽尾還有肽橋聚合而成，是N-乙酰葡萄糖胺（NAG）和N-乙酰胞壁酸（NAMA）交替連接的雜多糖與不同組成的肽交叉連接形成的多層網(wǎng)狀大分子結(jié)構(gòu)。其是一種多糖與氨基酸相連的多糖復(fù)合物，由于此復(fù)合物中氨基酸鏈不像蛋白質(zhì)中的那樣長(zhǎng)，故稱肽聚糖。肽聚糖是許多細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，不同的肽聚糖中出現(xiàn)的氨基酸數(shù)是有限的，亞肽單位及間肽橋上氨基酸的組成及排列上的不同，決定了肽聚糖種類的多樣性(和致中 1992)。
5、近年來的大量的研究結(jié)果表明，肽聚糖具有包括佐劑活性在內(nèi)的多種生物活性。肽聚糖能對(duì)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生不同的免疫調(diào)節(jié)作用，能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，是一種免疫系統(tǒng)的免疫增強(qiáng)劑。肽聚糖能夠刺激B、T淋巴細(xì)胞，增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫，激活單核細(xì)胞及多核白細(xì)胞的吞噬活性，活化補(bǔ)體(聞?dòng)衩返取?992)，其分子中的多糖成分還具有抗腫瘤，抗感染能力（Takashi1994）。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中投喂肽聚糖后發(fā)現(xiàn)，其能顯著提高水產(chǎn)動(dòng)物如五條鰤（Ttami1996）、斑節(jié)對(duì)蝦（SitdhiBoonyaratpalin1995）、日本對(duì)蝦（Itami1998）等抗病力和成活率。
6、因此，使用肽聚糖有利于解決水產(chǎn)養(yǎng)殖中大量使用抗生素藥物防治病害所表現(xiàn)出的生物抗藥性問題及食品的藥物殘留問題。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)烏鱧人工注射諾卡氏菌細(xì)胞壁肽聚糖粗提物，研究其對(duì)烏鱧免疫活性指標(biāo)的影響，為烏鱧諾卡氏菌病的防治提供理論參考。二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：研究基本內(nèi)容：1.諾卡氏菌細(xì)胞壁肽聚糖的分離提取。2.通過腹腔注射的方式，對(duì)烏鱧注射諾卡氏菌細(xì)胞壁肽聚糖粗提物，研究其對(duì)烏鱧免疫活性指標(biāo)的影響。擬解決的主要問題：1.諾卡氏菌細(xì)胞壁肽聚糖的提取方法。2.烏鱧免疫活性指標(biāo)的篩選及測(cè)定方法的建立。三、研究的方法與技術(shù)路線：研究的方法:
7、1.試驗(yàn)用魚：烏鱧2.試驗(yàn)用菌：鰤?mèng)~諾卡氏菌(Nacardiaseriolea)3.試劑與藥品：三氯乙酸（TCA）、胰蛋白酶磷酸緩沖液(3mg/mL胰蛋白酶、0.1mol/L磷酸緩沖液、pH8.0)、肝素鈉、生理鹽水、白細(xì)胞稀釋液（冰醋酸1.5ml、1%龍膽紫1ml、蒸餾水97.5ml）、溶壁微球菌(Microcrococcuslysodeikticus)、紅細(xì)胞稀釋液（NaCl0.5g、硫酸鈉2.5g、氯化汞0.25g、蒸餾水加至100ml）、溶壁微球菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（牛肉浸膏1.5g、蛋白胨2.5g、NaCl4.0g、瓊脂7.5g、蒸餾
8、水500mL、pH=7.4）、丙酮、乙醚等。4.主要器材：玻璃缸、注射器、生化自動(dòng)分析儀、離心機(jī)、顯微鏡等5.實(shí)驗(yàn)方法：5.1諾卡氏菌細(xì)胞壁肽聚糖粗提物的制備：參考宋曉玲等（20
