J2 Scientific GPC凝膠滲透色譜操作指導(dǎo)

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1、.J2ScientificGPC凝膠滲透色譜操作指南應(yīng)用部分在您閱讀本指南之前，最好先熟悉儀器的操作，并已經(jīng)掌握<軟件中文操作手冊>中的內(nèi)容。本指南旨在幫助新用戶掌握儀器的維護(hù)，方法建立及簡單的故障排除，北京綠綿巨貿(mào)科貿(mào)有限公司對此指南保留全部權(quán)力，任何未經(jīng)允許的復(fù)制、轉(zhuǎn)載及其他以贏利為目的的商業(yè)行為均構(gòu)成對本公司的侵權(quán)。凝膠滲透色譜原理簡介Accuprep系統(tǒng)結(jié)構(gòu)及工作框圖注意事項(xiàng)如何建立適合我的應(yīng)用的方法GPC柱的維護(hù)和重新裝填如何備份數(shù)據(jù)常見故障分析.頁腳....凝膠滲透色譜原理簡介凝膠滲透色譜，簡稱GPC，是一項(xiàng)比較傳統(tǒng)的分離技術(shù)，GPC的柱子由化學(xué)惰性的中空小球組成，利用空

2、間排阻的原理對樣品進(jìn)行分離，詳見下圖：大分子不能從孔中通過小分子通過填料“球”中的孔由于小分子化合物會從填料的孔中穿過，而大分子從填料周圍的空間穿過，會造成小分子與大分子之間的行程差距，這樣大分子與小分子會先后從柱中餾出，起到分離的作用。由于這一分離技術(shù)不受樣品極性的影響，所以對于色譜用戶來說，是一種非常有效解決色譜柱不能分開的樣品的手段，尤其是對于脂肪類，蛋白及色素類大分子干擾物，這些物質(zhì)對于色譜柱，進(jìn)樣口來說非常危險，而在生物源樣品當(dāng)中的含量一般又比較高，那么在進(jìn)行樣品分析之前進(jìn)行一步GPC凈化就顯得非常必要了。.頁腳....Accuprep系統(tǒng)結(jié)構(gòu)及工作框圖AccuprerpT

3、M是由美國J2Scientific公司生產(chǎn)的凝膠滲透樣品凈化系統(tǒng)，早在上世紀(jì)80年代就引入中國，目前其產(chǎn)品型號主要有手動AccuPrepJr和自動AccuPrep兩種，在2005年該公司又推出了新型的AccuprerpTM　MPS系統(tǒng)，體積進(jìn)一步小型化，并能整合計(jì)算機(jī)及在線濃縮，SPE等多種技術(shù)，更加趨于成熟。由于目前大家采購這一儀器主要是為了提高效率，本指南將重點(diǎn)放在對自動儀器的介紹方面。AccuprerpTM自動系統(tǒng)AccuprerpTM手動系統(tǒng)AccuPrepMPS+AccuVapGPC在線濃縮系統(tǒng)AccuPrepMPS自動系統(tǒng)一臺完整的GPC系統(tǒng)包括幾個部分：觸摸屏，控制模塊

4、，輸送泵，檢測器，自動進(jìn)樣器和軟件部分。讓我們先來認(rèn)識一下儀器各部分：.頁腳....自動進(jìn)樣器柱子支架進(jìn)樣環(huán)與進(jìn)樣閥柱切換閥V1/V2閥觸摸屏檢測器輸送泵樣品架注射泵收集架工作框圖：詳見附錄1。.頁腳....注意事項(xiàng)：1.樣品在進(jìn)樣前必須經(jīng)0.45u的微孔膜過濾。2.含水量大的樣品在進(jìn)樣前須脫水。3.對于快速柱來說，脂肪耐受力為0.5克；傳統(tǒng)柱為1克，那么在進(jìn)樣前請以此為根據(jù)來計(jì)算取樣量。例如某種樣品的脂肪含量為20%，那么稱樣量請不要大于2.5克。4.在完成前面的樣品處理后，如液液萃取，要將樣品體系轉(zhuǎn)換成GPC所用的流動相，一般來說除石油醚外，其它基質(zhì)如丙酮，必須進(jìn)行這樣的轉(zhuǎn)換。而

5、如果采用乙酸乙酯這類與水互溶的溶劑進(jìn)行萃取，最好過無水硫酸鈉脫水。如果樣品溶劑無法進(jìn)行轉(zhuǎn)換，那么不同的溶劑總量不得大于進(jìn)樣量的10%。5.GPC柱要求流動相與柱子規(guī)格一致，請不要隨意變更流動相的比例及組成。6.系統(tǒng)主要采用尼龍接頭，在連接時適當(dāng)擰緊即可，過度用力會造成螺紋損壞。7.PTFE的連接管比較脆，不可折成死彎，并在移動儀器時小心。8.嚴(yán)禁使用酸，堿性流動相，嚴(yán)禁使用水做為流動相，嚴(yán)禁使用緩沖鹽。9.流動相最好每次配制的量夠用，如果放置時間過長，最好重新配制。對于乙酸乙酯來說長時間放置會吸收水分，二氯甲烷見光分解后會產(chǎn)生鹽酸，這些都非常不利于GPC分析。10.如果有其它不明事項(xiàng)

6、，請咨詢我公司工程師，請勿自行嘗試。.頁腳....如何建立適用于自己的分析方法針對一般的農(nóng)藥/獸藥殘留分析來說，樣品基質(zhì)中的大分子干擾物主要為色素，脂肪及蛋白，多糖等生物源的干擾物。這類物質(zhì)對于后面的色譜分析來說，是非常令人討厭的，不但會帶來噪音高，雜峰多，而且會污染色譜的進(jìn)樣口，離子源，并對色譜柱的壽命也會有很大影響。雖然還有其它方法進(jìn)行凈化，例如氧化鋁柱，酸性硅膠柱等，但這類方法多數(shù)會對　待測樣品有不同程度對的吸咐，會引起回收率的問題。根據(jù)凝膠滲透色譜的原理，大分子干擾物會率先從柱子中流出，隨后是小分子的目標(biāo)化合物，那么對于一個GPC的方法來說，關(guān)鍵在于找出什么時間收集，什么時間

7、停止收集。為了說明如何找到準(zhǔn)確的收集時間，我們以50%乙酸乙酯/50%環(huán)已烷的GCP色譜柱對溴氫菊酯凈化為例：1．移取2ml，100ppm的溴氫菊酯標(biāo)準(zhǔn)品（請用1：1乙酸乙酯：環(huán)已烷配制）到樣品瓶，并加入1ml色拉油最后定容至10ml,做為我們的待分析樣品。2．在軟件中，編輯方法default.met,對于快速柱來說，第一個餾分設(shè)定30分鐘不選擇收集流速設(shè)定為4.7ml/min,　2到5餾分都不進(jìn)行設(shè)定選擇記錄檢測器數(shù)據(jù)選擇合適的柱子保存方法即可。3．編輯