病毒半數(shù)致死量、感染量(LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50)測定法.pdf

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1、2010年版獸藥典三部增、修訂品種品名中國獸藥典(2010年版三部)半數(shù)保護量（PD50）測定法將樣品按適宜的倍數(shù)進行倍比稀釋，取至少3個劑量組，按產(chǎn)品推薦的使用途徑，每個劑量組接種1組動物，同時設(shè)1組動物作為對照。接種一定時間后，連同對照動物，每頭（只）攻擊一定劑量的強毒，觀察一定時間。記錄各組動物的發(fā)病情況，動物發(fā)病即判為不保護。計算各劑量組免疫動物保護的百分率。對照動物的發(fā)病率應(yīng)符合規(guī)定。按Reed-Muench法計算PD50。表XX.口蹄疫滅活疫苗的試驗示例疫苗接種觀察結(jié)果累計結(jié)果劑量發(fā)病數(shù)保護數(shù)保

2、護比例發(fā)病數(shù)保護數(shù)保護率半數(shù)保護（％）量（PD50）1頭份055/509100測定法1/3頭份233/524671/9頭份411/56114高于50%－50%67%-50%距離比例===0.32高于50%－低于50%67%-14%稀釋系數(shù)（1/3）的對數(shù)為－0.48。高于50％保護時（上例中為67％）疫苗接種劑量（1/3頭份）的對數(shù)值為–0.48。logPD50=－0.48+0.32?（－0.48）=－0.63－0.63則：PD50=10頭份，即疫苗的一個PD50為0.23頭份，表示該疫苗接種0.23頭份可

3、以使50％的動物獲得保護。每頭份疫苗合4.3PD50。病毒半數(shù)致死量、感染量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TCID50）測定法病毒半數(shù)將病毒懸液作10倍系列稀釋，取適宜稀釋度，定量接種實驗動物、胚或細胞。由最高稀致死量、釋度開始接種，每個稀釋度接種4～6只（枚、管、瓶、孔），觀察記錄實驗動物、胚或細胞的感染量死亡數(shù)或病變情況，計算各稀釋度死亡或出現(xiàn)病變的實驗動物（胚、細胞）的百分率。按（LD50、Reed-Muench法計算半數(shù)致死（感染）量（LD50、ELD50、ID50、EID50、TC

4、ID50）。ELD50、計算公式為：ID50、logTCID50=高于50％的病毒稀釋度的對數(shù)+距離比例?稀釋系數(shù)的對數(shù)EID50、表XX試驗示例（以TCID50為例，接種量為0.1ml）TCID50）病毒稀釋觀察結(jié)果累計結(jié)果測定法度CPE數(shù)無CPE數(shù)CPE（％）CPE數(shù)無CPE數(shù)CPE（％）－41060100130100－51051837188－61024332529－7100600110高于50%-50%88%-50%距離比例===0.64高于50%-低于50%88%-29%10倍系列稀釋的稀釋系數(shù)的對

5、數(shù)為－1。高于50％感染時（上例中為88％）病毒稀釋度－5（10）的對數(shù)值為－5。logTCID50=－5+0.64?（－1）=?5.64=－5.64－5.64則：TCID5010/0.1ml。表示該病毒懸液作10稀釋后，每孔（瓶）細胞接種0.1ml，可以使50％的細胞產(chǎn)生細胞病變（CPE）。