SIRT1在胃癌組織中的表達(dá)及其機(jī)制研究.pdf

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1、分類(lèi)號(hào)；Ｒ３２２；１０４４０單位代碼密級(jí)：公開(kāi)學(xué)號(hào)：２０１２１１００５⑥浩透掌巧碩女＃後化戈ＳＩＲＴ１在胃癌組織中的表達(dá)及其機(jī)制研究ＳＩＲＴ１ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅ研祝生；安曉靜指導(dǎo)教?zhēng)煟海犛嗖\教授申請(qǐng)學(xué)位口類(lèi)級(jí)別：醫(yī)學(xué)碩ｚｂ學(xué)科、專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)；人體解剖與姐織廝胎學(xué)所在院（系）；基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院——二０二一入學(xué)日期：日論文完成日期年九月：二０五年

2、互月十日：１０４４０分類(lèi)號(hào)：民３２２單位代碼密級(jí)：公開(kāi)學(xué)號(hào)：２０１２１１００５戀鎮(zhèn)透掌殘巧女《像裕戈ＳＩＲＴ１在胃癌組織中的表達(dá)及其機(jī)制研究ＳＩＲＴ１ｅｎｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｇｐｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅ研究生：安曉靜指導(dǎo)教師：金昌珠教授申請(qǐng)學(xué)位口類(lèi)級(jí)別：醫(yī)學(xué)碩±學(xué)科、專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：人體解剖與組織胚胎學(xué)所在院：基石出醫(yī)學(xué)院（系）——二一日論文完成日期入學(xué)日期：二〇年九月：二０

3、五年蘭月十曰原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得濱州醫(yī)學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料一。與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。。研究生簽名；時(shí)間：年ｙ月３日Ｓ礙ｉ｜｜關(guān)于論文版權(quán)使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解濱州醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留，、使用學(xué)位論文的規(guī)定艮Ｐ；學(xué)校有權(quán)保留送交論文的

4、復(fù)印件和電子材料，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)濱州醫(yī)學(xué)院可將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可Ｗ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。（保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議）研究生簽名廠(chǎng)＾導(dǎo)師簽名：時(shí)間；辟Ｘ月如日濱州醫(yī)學(xué)院碩＋學(xué)位論義目錄中文摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ３縮略詞表６前胃８ＩＥ義１０一第部分ＳＩＲＴ１在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義１０１．材料與方法１０２．１結(jié)果５３１７．職２０參考文獻(xiàn)第二部分ＳＩＲＴ１及其突變體

5、Ｔ２００Ｉ、Ｅ４２０Ｋ真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定２３１．材料和方法巧２．２９結(jié)果３．職３１３４參考ｉ；：獻(xiàn)第Ｈ部分ＳＩＲＴ１基因及其突變體對(duì)２９３Ｔ細(xì)胞増殖及細(xì)胞周期的影響３６１．６材料與方法３４２．結(jié)果３３．ｉ４７嫌５０參考文獻(xiàn)全文總結(jié)巧文獻(xiàn)綜述巧敬謝６２碩±期間發(fā)表論文情況６３濱州醫(yī)學(xué)院碩±學(xué)位論義中文摘要目的：１１－檢測(cè)０例胃癌組織中ＳＩＲＴ１、ｐｃａｔｅｎｉｎ的表達(dá)水平并探討其與胃癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。通過(guò)克隆別ＲＴ１基因的全長(zhǎng)ｃＤ

6、ＮＡ構(gòu)建含有ＳＩＲＴ１及其突變Ｔ４２０Ｋ一體２００Ｉ和Ｅ基因的重組真核表達(dá)載體，從而進(jìn)步研究在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中ＳＩＲＴ１及其突變體所發(fā)揮的生物學(xué)功能。方法：收集１０１例濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)切除的胃癌組織，制作石蠟標(biāo)本，通過(guò)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)Ｓ－ｃａｔｅｎｉｎＩＲＴ１、ｐ的表達(dá)并分析其與腫瘤臨床病理特征的－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)方法擴(kuò)增Ｓ相關(guān)性。民ＴＩＲＴ１基因的全長(zhǎng)ｃＤＮＡ，其擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)雙酶切被克隆至ｐｃＤＮＡ３．１（＋）真核表達(dá)載體中，從而使ＳＩＲＴ１基因表達(dá)增加。同時(shí)采用定點(diǎn)突變的方法構(gòu)建ＳＩＲＴ１基因的突變體Ｔ２０

7、０Ｉ和Ｅ４２０Ｋ，進(jìn)而獲得其真核ｃＤ３＋－Ｔ２ＩｃＤＮＡ３－表達(dá)載體ｐ．＋Ｅ４２。ＮＡ．１００和ｐ１０Ｋ重組質(zhì)粒通過(guò)酶切和ＤＮＡ（）（）測(cè)序比對(duì)得Ｗ鑒定ｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎ實(shí)驗(yàn)從蛋白水平上證實(shí)重組真核表，同時(shí)采用Ｗｇ達(dá)載體構(gòu)建成功。制備感受態(tài)細(xì)胞、做質(zhì)粒轉(zhuǎn)化并通過(guò)質(zhì)粒抽提獲取足量的－＋－－ＩｐｃＤＮＡ３．１＋，ｐｃＤＮＡ３．１＋ＳＲＴＫｃＤＮＡ３．１（Ｔ２００ＫｃＤＮＡ３．１＋Ｅ４２０Ｋ（）（）ｐ）ｐ（）２９３Ｔ真核表達(dá)載體，，然后將其通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中分別采用ＭＴＴ、流式細(xì)胞術(shù)的方法檢測(cè)無(wú)ＤＮＡ轉(zhuǎn)

8、染的空白對(duì)照（空白組）、空載體ｃ３ＤＮＡ＋－ＷＴｐＤＮＡ．１＋空載姐）、重組載體ｐｃ３．１ＳＴＲＴ１組）、（