淫羊藿多糖的分離純化和結構鑒定及生物活性研究.pdf

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1、萬方數(shù)據(jù)SichuanAgriculturalUniversityMasterDisertationExtraction，StructuralCharacterizationandBiologicalActivitiesofPolysaccharidesfromEpimediumacuminatumByChengHao—ranSupervisor：ProfessorDingChun—bangMajor：BotanyYa’an，Sichuan，P．R．C．April，2014萬方數(shù)據(jù)論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行研究工作所取得的成

2、果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，學位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：徑燃如fcf年()月歹日關于論文使用授權的聲明本人完全了解四川農業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意四川農業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全

3、部或部分內容。昭采論文不保密?？诒菊撐谋Ｃ?，在一年解密后適用本授權。(請在以上口內戈0。，v”)研究生簽名：檉浩鄉(xiāng)≮、導師簽名：)3秀妁7cf年6月P曰)口／q年G月5日萬方數(shù)據(jù)于兩要淫羊藿為小檗科(Berberidacea)淫羊藿屬(Epimedium)多年生草本植物的統(tǒng)稱，其莖葉可入藥，辛溫無毒，為中國傳統(tǒng)補益中藥，具有補腎壯陽，祛風除濕，治療陽痿，腰膝無力，四肢不仁，半身不遂等藥效。現(xiàn)代藥理學研究表明，淫羊藿主要活性成分是黃酮類和多糖，具有廣闊而顯著的藥用價值，對心腦血管和腫瘤等重大疾病療效顯著。目前淫羊藿屬植物的研究和開發(fā)多局限于黃酮類物質，其中總黃酮和淫羊

4、藿苷含量是判斷淫羊藿藥材質量的標準，而對淫羊藿多糖的研究則相對滯后。研究表明植物多糖生物活性廣泛，且毒副作用較小，具有廣闊的開發(fā)前景。粗毛淫羊藿(EpimediumacuminatumFranch．)因總黃酮和淫羊藿苷的含量較低而未被收錄于《中國藥典》，但其分布廣泛，生物量較高，在四川等許多地方也被當做藥材使用，具有較大的開發(fā)潛力。本研究以粗毛淫羊藿為對象，分別采用傳統(tǒng)熱水浸提法、超聲波輔助提取法、酶提法和微波輔助提取法四種常規(guī)方法提取淫羊藿多糖，探討提取方法對淫羊藿多糖理化性質和生物活性的影響，并對提取工藝進行優(yōu)化，旨在提高淫羊藿多糖的提取率、降低提取能耗，最后對

5、淫羊藿多糖進行分級純化，研究其構效關系，為粗毛淫羊藿多糖的開發(fā)利用提供理論基礎。主要結果如下：1．分別采用熱水法、超聲波法、酶法和微波法提取淫羊藿多糖，多糖提取液經(jīng)乙醚和丙酮洗滌、Sevage法和半透膜透析除去蛋白質和小分子雜質，濃縮干燥后得熱水提粗多糖、超聲波提粗多糖、酶提粗多糖和微波法提粗多糖。2．采用化學成分分析、紅外光譜分析和電鏡掃描對四種粗多糖理化性質進行研究。結果表明四種粗多糖的化學成分一致，主要官能團沒有差異，均存在結合蛋白，但末端糖苷鍵構型不同，熱水提、酶提和微波輔助提粗多糖均為p．糖苷鍵，而超聲波輔助提粗多糖為a．糖苷鍵。掃描電鏡顯示熱水提粗多糖和

6、酶提粗多糖表面平整光滑，超聲波提粗多糖和微波提粗多糖表面粗糙，凹凸不平且伴有空洞?？寡趸u價結果表明，熱水提粗多糖清除DPPH自由基和ABTS自由基能力、還原能力、抑制紅細胞溶血能力顯著高于另外三種粗多糖。3。對熱水浸提法提取淫羊藿多糖工藝進行響應面法優(yōu)化，采用三因素三水平的中心組和設計，分別進行20組試驗，以多糖得率為響應值，建立影響多糖得率的二次多項式數(shù)學模型。根據(jù)模型，確定了熱水浸提法提取淫羊藿多糖的最佳工藝條萬方數(shù)據(jù)件為：料液比為29．61mL／g、提取溫度為85．67。C以及提取時間3．57h，實際得率為8．21％。4．對淫羊藿多糖組分進行了分離和結構鑒定

7、。通過酒精梯度分級、陰離子交換層析和凝膠滲透層析將淫羊藿粗多糖分成極性不同、帶電荷量不同以及相對分子量不同的三個純化多糖片段：EAP．40．1、EAP．60．1和EAP．80．2。三個多糖片段的主要化學成分和官能團沒有區(qū)別，但相對分子量大小和單糖組成不同，EAP．40．1的相對分子量為138kD，主要由葡萄糖和半乳糖組成；EAP．60．1的相對分子量為114kD，主要含葡萄糖和甘露糖；EAP．80．2的相對分子量為65kD，主要單糖組成為半乳糖。5．采用DPPH法、ABTS法、鐵離子還原能力、羥基自由基清除試驗、紅細胞溶血抑制試驗和脂質過氧化抑制試驗，對三種淫羊