油菜菌核病接種和觀察.doc

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1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)（習(xí)）報(bào)告班級(jí)：姓名：日期：實(shí)驗(yàn)四油菜菌核病的田間調(diào)查及接種鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠筒司瞬。塾蒘clerotiniasclerotiorun（Lib.）Debary引起］是油菜的主要病害，能分泌一種毒素，其主要成分是草酸，在致病過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。一般情況下可導(dǎo)致油菜減產(chǎn)10%-20%；嚴(yán)重情況下可減產(chǎn)80%,甚至絕收。目前，油菜中還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)抗性品種，所以品種經(jīng)過(guò)接種菌核病病菌后，均表現(xiàn)為發(fā)病。不同品種的生育期不同，發(fā)育進(jìn)程中遇到的發(fā)病條件不同，發(fā)病程度也就不同。因此，該病原菌培育抗病品種是防治油菜菌核病既經(jīng)濟(jì)、有效，又安全的措施。于是在油菜雜交育種中對(duì)菌核病

2、抗性鑒定和抗原的篩選尤為重要，而鑒定方法的選用乂是其關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)調(diào)查油菜田間菌核病發(fā)病情況，旨在掌握田間菌核病發(fā)病癥狀，同時(shí)了解菌核病抗性鑒定的兒種方法，通過(guò)比較了解各種方法特點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.油菜菌核病的田間調(diào)查實(shí)驗(yàn)選取2個(gè)品種（早熟和晚熟），在油菜成熟期，分別調(diào)查菌核病田間的自然發(fā)病情況，每個(gè)品種6（）株，最后進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析。2.油菜菌核病的接種鑒定實(shí)驗(yàn)在油菜角果成熟期間，采用牙簽接種和菌絲瓊脂塊接種兩種方法。分別對(duì)0727AB/2H293R和9799-8ABL/5862R兩個(gè)油菜品種進(jìn)行接種，觀察接種后的癥狀并記錄病害發(fā)生過(guò)程，最后分別調(diào)查接種后10

3、個(gè)植株的發(fā)病情況。三、材料與工具1.材料：多個(gè)油菜品種的田間群體，用于試驗(yàn)的抗感材料，病原菌為采自試驗(yàn)田甘藍(lán)型油菜殘茬上的菌核，接種于土豆培養(yǎng)基（PDA）萌發(fā)菌絲后繼代兩次，4°C保存用于接種。1.工具：紙牌，小刀，鉛筆、牙簽、薄膜等。四、方法步驟（一）油菜菌核病的田間鑒定實(shí)驗(yàn)1.病害識(shí)別油菜在整個(gè)生育期均可發(fā)病，結(jié)實(shí)期發(fā)病最重。莖、葉、花、角果均可受害，莖部受害最嚴(yán)重。葉片染病初時(shí)，呈不規(guī)則水漬狀，后形成近圓形至不規(guī)則形病斑，病斑中央黃褐色，外圍暗青色，周緣淺黃色，病斑上有時(shí)輪紋明顯，濕度大時(shí)長(zhǎng)出白色棉毛狀菌絲，病葉易穿孔。莖部染病，初現(xiàn)淺褐色水漬狀病斑，后發(fā)展為具輪紋狀

4、的長(zhǎng)條斑，邊緣褐色，濕度大時(shí)表面生棉絮狀口色菌絲，偶見(jiàn)黑色菌核，病莖內(nèi)髓部爛成空腔，內(nèi)生很多黑色鼠糞狀菌核。病莖表皮開(kāi)裂后，露出麻絲狀纖維，莖易折斷，致病部以上莖枝萎驚枯死。角果染病時(shí)，初現(xiàn)水漬狀褐色病斑，后變灰白色，種子癟瘦，無(wú)光澤。2.病害級(jí)別和病害指數(shù)各個(gè)品種在田間條件下，均可能有一定的發(fā)病。病害程度依照周必文等1994年提出的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查。0級(jí)：全株莖、枝、果軸無(wú)癥狀；1級(jí)：全株1/3以下分枝數(shù)（含果軸，下同）發(fā)病或主莖有小型病斑，全株受害角果數(shù)（含病害引起的非生理性早熟和不結(jié)實(shí)，下同）在1/4以下；2級(jí)：全株1/3?2/3分枝數(shù)發(fā)病，或分枝發(fā)病數(shù)在1/3以下而主莖

5、中上部有大型病斑，全株受害角果數(shù)達(dá)1/4?1/2；3級(jí)：全株2/3以上分枝數(shù)發(fā)病，或分枝發(fā)病數(shù)在2/3以下而主莖中下部有大型病斑，全株受害角果數(shù)達(dá)1/2~3/4；4級(jí)：全株絕大部分分枝數(shù)發(fā)病，或主莖有多個(gè)病斑，或主莖中下部有大型繞莖病斑，全株受害角果數(shù)達(dá)3/4以上。工,（每級(jí)別「的植株數(shù)X病害級(jí)別z）病情指數(shù)DI=X100%鑒定植株總數(shù)X發(fā)病最高級(jí)別（4）3.病害程度調(diào)査選取2個(gè)品種（早熟和晚熟），在油菜成熟期，分別調(diào)查菌核病田間的自然發(fā)病情況，并統(tǒng)計(jì)在菌核病HI間調(diào)查表中。（二）油菜菌核病的接種鑒定實(shí)驗(yàn)在油菜角果成熟期間，采用牙簽接種和菌絲瓊脂塊接種兩種方法。首先觀察并記

6、載接種效果和病害發(fā)生進(jìn)程，給出接種后的癥狀描述和病害發(fā)生過(guò)程的照片,評(píng)述接種效果；然后調(diào)查各處理接種株的病害級(jí)別；最后統(tǒng)計(jì)在菌核病田間調(diào)查表(接種)中。其接種具體操作方法如下：1?牙簽接種法將牙簽均勻擺放于9cm培養(yǎng)皿中，呈輻射狀，然后倒入PDA培養(yǎng)基，接種活化菌絲培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)至牙簽前部，并用I矢用傲子在第二片或第三片無(wú)柄葉莖稈處打孔后插入帶菌牙簽。接種后3d開(kāi)始，每2d調(diào)查1次主莖病斑長(zhǎng)度，共調(diào)查3?4次。2.菌絲瓊脂塊接種法取菌落邊沿8cm菌絲塊接種于第二或三片無(wú)柄葉葉腋處，并將菌絲面貼莖稈，菌絲塊和莖稈外圍以保鮮膜包裹，保持濕度。接種后3d開(kāi)始，每2?3d調(diào)查1次主莖

7、病斑長(zhǎng)度，成熟前調(diào)查病級(jí)。最終，通過(guò)以上各試驗(yàn)操作方法所得數(shù)據(jù)，比較兩個(gè)品種、兩種接種方式和未接種處理(大出自然發(fā)病情況)的病情指數(shù)，寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.本試驗(yàn)所選取的2個(gè)甘藍(lán)型油菜兩系雜交種(0727AB/2H293R和9799?8AB?/5862R),菌核病在油菜成熟期山間的自然發(fā)病情況如表1所示。表1菌核病田間調(diào)查表(自然發(fā)病)品種或群體名稱各個(gè)病害級(jí)別的植株數(shù)總數(shù)病情指數(shù)(%)012340727AB/2H293R291611406020.839799-8ABr/5862R523181046043.