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《化學(xué)發(fā)光磁微粒免疫分析法定量檢測(cè)HBsAg.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、DOI:10.13602/j.cnki.jcls.2013.11.016·836·臨床檢驗(yàn)雜志2013年11月第31卷第11期ChinJClinLabSci，Nov．2013，Vol．31，No．11文章編號(hào):1001-764X(2013)11-836-02·臨床檢驗(yàn)技術(shù)研究·化學(xué)發(fā)光磁微粒免疫分析法定量檢測(cè)HBsAg1，2333313周齊洋，金晶，江波，先小龍，顏彬，呂華，蘇恩本(1．東南大學(xué)生物科學(xué)與醫(yī)學(xué)工程學(xué)院，南京210096;2．江蘇省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，南京210022;3．南京基蛋生物科技有限公司，南京211505)摘要:目的建立定量檢測(cè)HBsAg的化學(xué)發(fā)光磁微粒免疫分析
2、法。方法2株抗HBs單克隆抗體分別標(biāo)記吖啶衍生物和生物素化，生物素化的抗HBs通過鏈霉親合素包被到磁珠上形成致敏磁珠。將待測(cè)標(biāo)本加入吖啶標(biāo)記的抗HBs(吖啶-抗HBs)與致敏磁珠的體系中，形成致敏磁珠-HBsAg-吖啶標(biāo)記抗HBs夾心復(fù)合物，磁性分離清洗。重復(fù)加樣1次，磁性捕獲分離后激發(fā)吖啶衍生物發(fā)光，用化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)光強(qiáng)度，計(jì)算標(biāo)本中HBsAg的濃度。結(jié)果該法線性方程為Y=0．919X+4．28，相2關(guān)系數(shù)r為0．99，線性范圍為0．0197～250．00IU/mL。靈敏度可達(dá)0．0207IU/mL。0．1、3．2和40IU/mL樣本各重復(fù)測(cè)定10次的變異系數(shù)(CV)值分別為
3、2．70%、4．40%和2．70%。與Abbott公司HBsAg定量檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)2法)檢測(cè)40份標(biāo)本濃度的線性相關(guān)方程為Y=0．9808X+0．2099，r=0．99，兩法結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1．519，P＞0．05)。以10、50、100和200IU/mL作為檢定點(diǎn)，各檢定點(diǎn)相對(duì)偏差分別為0．18%、1．50%、1．71%和1．81%。結(jié)論建立的方法有較高的靈敏度、合適的線性，同時(shí)具備良好的可重復(fù)性，與Abbott公司試劑盒檢測(cè)結(jié)果高度相關(guān)。關(guān)鍵詞:磁珠化學(xué)發(fā)光免疫分析法;靈敏度;HBsAg中圖分類號(hào):Ｒ446．6文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A［1］HBsAg陽性為H
4、BV感染的標(biāo)志?；瘜W(xué)發(fā)光微1．3．1生物素化GP3SAB制備按照物質(zhì)的量粒子免疫分析(chemiluminescentmicroparticleimmu-比1∶100的比例將生物素琥珀酰亞胺酯溶液(10noassay，CMIA)法因其檢測(cè)速度快以及可以全自動(dòng)g/L)迅速加至GP3SAB單抗中，37℃溫育2h后取化備受青睞，近年來逐漸取代ELISA法而成為大型出，置于4℃用PBS(20mmol/L，pH7．5)透析，每4醫(yī)院檢驗(yàn)科常備的檢測(cè)HBsAg的手段。Abbott公h更換1次透析液，更換1～2次。透析結(jié)束后加入司CMIA定量檢測(cè)HBsAg試劑盒的參考值為＜儲(chǔ)存添加液和甘油后置－
5、20℃保存。0．05IU/mL，檢測(cè)的靈敏度很高，但尚無國產(chǎn)同類1．3．2吖啶衍生物標(biāo)記GP7SAB按物質(zhì)的量比試劑。為此，本研究建立了一種可大幅度提高1∶70的比例將吖啶衍生物(4g/L)迅速加入HBsAg檢測(cè)靈敏度的化學(xué)發(fā)光磁微粒分析方法。GP7SAB單抗中，37℃溫育2h后取出，用20mmol/LPBS(pH7．5)置于4℃透析，每次使用4L1材料與方法透析液，每6h更換1次透析液，使用MagiCL68001．1標(biāo)本來源收集2013年1～6月南京市第二全自動(dòng)磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析儀測(cè)定透析液的相人民醫(yī)院檢測(cè)HBsAg的血清標(biāo)本40份。以Abbott對(duì)發(fā)光強(qiáng)度(ＲLU)，直至透
6、析液測(cè)定ＲLU低于公司HBsAg定量檢測(cè)試劑盒(CMIA法)檢測(cè)HBsAg1000，將吖啶衍生物標(biāo)記GP7SAB加入甘油保存。［2］濃度，其中25份陰性(＜0．05IU/mL)，15份陽性1．3．3磁珠包被鏈霉親合素取1mL5mg/mL(＞0．05IU/mL)。的氨基磁性微珠懸液于離心管中，磁性分離，去除上1．2儀器與試劑MagiCL6800全自動(dòng)磁微?；?用6mL磁性微珠包被液(20mmol/LPBS，pH學(xué)發(fā)光免疫分析儀、小鼠抗HBs單克隆抗體7．5)將磁性微珠重懸浮;加入25%戊二醛2mL于GP3SAB、GP7SAB(南京基蛋公司)，酪蛋白(上海拜懸液中，活化3h;用磁性微
7、珠包被液洗滌活化磁性力公司)，氨基磁性微珠(天津倍思樂色譜技術(shù)開發(fā)微珠3次，磁性分離棄上清;將清洗好的磁性微珠懸中心)，吖啶衍生物(上海邁拓崴公司)，生物素琥珀浮于磁性微珠包被液中，加入5mg/mL的鏈霉親合酰亞胺酯、鏈霉親合素(美國ThermoFisher公司)，素0．5mL后，反應(yīng)6h;磁性分離，去除上清，將已包Tween-20、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉(南京化被磁珠懸浮于包被液中，再加入2g/LBSA，混勻，學(xué)試劑公司)，Proclin300防腐劑(美國S
