【精品】鐵皮石斛組織培養(yǎng).doc

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1、鐵皮石斛組織培養(yǎng)研究進(jìn)展組織培養(yǎng)摘要：近年來(lái)，對(duì)鐵皮石斛的需求日趨增加，而野生資源難以滿足市場(chǎng)需求，組織培養(yǎng)技術(shù)使大規(guī)模人工栽培成為可能。從種子萌發(fā)、原球莖分化、生根與壯苗、原球莖增殖等方面闡述了近年來(lái)關(guān)于鐵皮石斛組織培養(yǎng)技術(shù)的研究概況，并展望了發(fā)展前景。鐵皮石斛為蘭科石斛屬植物，是傳統(tǒng)名貴中藥材?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》列為上品，具有益胃生津、滋陰清熱、止咳潤(rùn)肺的功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，石斛還具有抗腫瘤、抗衰老、增強(qiáng)人體免疫力和擴(kuò)張血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，種子需與真菌共生才能萌發(fā)，加上長(zhǎng)期采挖，使得野生鐵皮石斛資源日漸枯竭，成為瀕危植

2、物，被列為國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)的野生藥材品種。為了滿足市場(chǎng)的需求，國(guó)內(nèi)許多科研人員進(jìn)行了鐵皮石斛組織培養(yǎng)技術(shù)的研究。1種子萌發(fā)1.1胚齡不同種齡的種子萌發(fā)率不一樣。葉秀嶙等取鐵皮石斛2~6個(gè)月種齡的種子進(jìn)行組織培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，種齡愈長(zhǎng)，萌發(fā)率愈高。2個(gè)月種齡的種子接入改良N6培養(yǎng)基中，萌發(fā)率僅為6%;3個(gè)月種齡的種子接入改良嘆培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2周后開(kāi)始萌發(fā)，萌發(fā)率為87%;4一6個(gè)月種齡的種子接入培養(yǎng)基中，只要培養(yǎng)一周即可萌發(fā)，萌發(fā)率為95%。曾宋君等將鐵皮石斛種子接入改良N6培養(yǎng)基中進(jìn)行組織培養(yǎng)，亦得到相似的結(jié)論，幼胚胚齡在60d以下時(shí)，萌發(fā)率極低，

3、隨著胚齡的增長(zhǎng)，其萌發(fā)期逐漸縮短，萌發(fā)率逐漸升高，成苗率也逐漸升高，但到達(dá)一定的胚齡后，差異并不明顯。1.2基本培養(yǎng)基鐵皮石斛種子在N6,改良N6,MS,1/2MS,SH、KS、VW、KundsonC,1/2N6,White等培養(yǎng)基上均可萌發(fā)。趙天榜等比較風(fēng)、MS等14種培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛種胚成苗率的影響，除殘外，所有的基本培養(yǎng)基均優(yōu)于其減半培養(yǎng)基，其屮以N6最好，SH、Kn、MS次之，1/2MS、1/2Vw最差。曾宋君等田將鐵皮石斛種子在SH、改良N6、MS、KS、VW、KundsonC培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得出最適培養(yǎng)基為改良N6或自制PT培

4、養(yǎng)基。羅吉鳳等比較了MS、1/2MS、1/2N6和White培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛種子萌發(fā)的影響，30d種子發(fā)芽率均達(dá)到95%,但1/2MS培養(yǎng)基上所萌發(fā)的原球莖較大。1.3激素在培養(yǎng)基屮添加一定濃度的NAA可促進(jìn)種子的萌發(fā)，濃度以0.2—0?5mg/L最適合胚的萌發(fā)和生長(zhǎng)，過(guò)高起抑制作用。2,4-D對(duì)胚的萌發(fā)起抑制作用。6-BA對(duì)胚萌發(fā)后的生長(zhǎng)起抑制作用。KT、IAA對(duì)胚萌發(fā)和成苗的影響不大，當(dāng)濃度超過(guò)lmg/L時(shí)，對(duì)胚萌發(fā)和成苗起抑制作用。ABA有抑制種子萌發(fā)和抑制植物生長(zhǎng)的作用，但張銘等發(fā)現(xiàn)ABA能顯著提高鐵皮石斛原球莖的質(zhì)量，濃度以0

5、.5mg/L為最佳。1.4天然添加物在培養(yǎng)基中添加適量的馬鈴薯汁、香蕉汁、椰乳可促進(jìn)鐵皮石斛種胚的萌發(fā)，但張玲等認(rèn)為香蕉提取物和椰乳對(duì)種子萌發(fā)和正常發(fā)育有不利影響，干擾其正常發(fā)育過(guò)程。1.5炭源在組培過(guò)程中適當(dāng)添加活性炭，可以吸附代謝過(guò)程中產(chǎn)生的廢棄物，防止組織褐變，并刺激胚胎的發(fā)生與生根，可加人2%蔗糖。曾宋君等在改良N6+NAA0.2mg/L的最適培養(yǎng)基上，發(fā)現(xiàn)以白糖、片糖為炭源時(shí)，胚萌發(fā)和成苗的效果比蔗糖好，這可能是白糖、片糖屮含有適合胚萌發(fā)和成苗的礦質(zhì)元素2原球莖增殖2.1基本培養(yǎng)基鐵皮石斛原球莖增殖可以1/2MS,MS等作為基

6、本培養(yǎng)基。張治國(guó)等研究了6種不同培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛原球莖增殖的影響，結(jié)果表明，1/2MS是原球莖增殖的適宜培養(yǎng)基。2.2激素適宜的NAA、KT、6—BA濃度對(duì)原球莖的增殖起促進(jìn)作用。唐桂香等以1/2MS為基本培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)BAl.Omg/L和NAAO.lmg/L有利于原球莖誘導(dǎo)增殖。蔣林等叫研究表明，l/2Ms+NAA1.0mg/L+KTO.2mg/L比較適合嗓球莖的增殖。蔣波等以1/2MS為基本培養(yǎng)基?添加BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L或6—BA3.0mg/L+NAAO.5mg/L的激素，原球莖的增殖系數(shù)較大。陳兆貴等認(rèn)為原球莖

7、增殖以MS+NAA1.0mg/L+6—BA1.0mg/L+KT1.0mg/L為最佳，35d增殖倍數(shù)達(dá)到5倍。2.3天然添加物椰子汁、蘋(píng)果汁對(duì)原球莖的增殖有較好的效果，但香蕉汁對(duì)原球莖的增殖有抑制作用。張治國(guó)等認(rèn)為原球莖增殖時(shí)最好不添加任何天然提取物。2.4炭源添加活性炭能使原球莖的壇殖量顯著增加，這可能是活性炭吸附了某種不利于原球莖增殖的物質(zhì)，蔗糖濃度0.5%-0.3%。周根余等比較了不同炭源對(duì)鐵皮石斛原球莖生長(zhǎng)的影響，發(fā)現(xiàn)原球莖在蔗糖中生長(zhǎng)最快，濃度3%,葡萄糖中其次，而乳糖中最慢。3原球莖分化3.1基本培養(yǎng)基鐵皮石斛原球莖分化可以1

8、/2MS,MS等作為基本培養(yǎng)基。張治國(guó)等比較了VW、N6、1/2MS、B5、KC等6種基本培養(yǎng)基對(duì)原球莖分化的影響，發(fā)現(xiàn)6種基本培養(yǎng)基附加馬鈴薯提取液和植物激素后，原球莖均可分化，但以1/2MS培養(yǎng)基作為原