糖耐量減低論文：艾塞那肽對(duì)igt合并nafld大鼠肝細(xì)胞抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用的研究

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1、糖耐量減低論文：艾塞那肽對(duì)IGT合并NAFLD大鼠肝細(xì)胞抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用的研究【中文摘要】通過(guò)觀察胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）受體激動(dòng)劑艾塞那肽（Exendin-4）干預(yù)治療糖耐量減低（IGT）合并非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）大鼠肝細(xì)胞C/EBP同源蛋白mRNA（CHOP）、CHOP蛋白、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白mRNA（SREBP-1c）的變化，并光鏡下觀察HE染色的肝組織，以脂肪變性肝細(xì)胞數(shù)與總肝細(xì)胞數(shù)的比值評(píng)估肝臟脂肪變性程度的變化，探討艾塞那肽對(duì)IGT合并NAFLD大鼠肝細(xì)胞抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用的機(jī)制。方法68只4～5周齡（l50g～180g）清潔雄性Wistar大鼠，

2、購(gòu)于山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心。適應(yīng)性喂養(yǎng)l周后（5只/籠），隨機(jī)分為正常糖耐量組（NGT組，18只）與糖耐量減低組（IGT組，50只），同組動(dòng)物體重相差小于10%，各組間動(dòng)物體重相差小于5%。NGT組常規(guī)飼料喂養(yǎng)（13.4kJ/g，其中脂肪提供熱量占10.2%，蛋白質(zhì)占23.3%，碳水化合物占66.5%）；IGT組高糖高脂飼料喂養(yǎng)（21.8kJ/g，其中脂肪提供熱量占56.0%，蛋白質(zhì)占7.0%，碳水化合物占37.0%），均自由飲水，室溫控制在18～22℃，相對(duì)濕度30%～70%，兩組大鼠每日早晚各投食一次，投食量為體重的3%，12周時(shí)，行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）：禁食8h后

3、，鼠尾采血用快速血糖儀測(cè)空腹血糖（FBG），以50%葡萄糖注射液2g/kg灌胃，2h后再次鼠尾采血測(cè)餐后2h血糖（2hPG）。以7.8mmol/L≤2hPG＜11.1mmol/L并持續(xù)一周以上為IGT造模成功。IGT組成模40只，成模率為80%。隨機(jī)取8只做肝組織HE染色，光鏡下觀察肝小葉內(nèi)1/3以上肝細(xì)胞呈彌漫大泡性脂肪變性及氣球樣變者確定為IGT合并NAFLD造模成功。IGT組NAFLD成模率100%，IGT合并NAFLD成模率為80%。成模后從IGT組隨機(jī)抽取16只設(shè)為干預(yù)組IGT/NAFLDEx組；另外16只設(shè)為對(duì)照組IGT/NAFLDNS組。隨機(jī)抽取大鼠NGT組9只、

4、IGT/NAFLDNS組8只、IGT/NAFLDEx組8只，禁食12小時(shí)后稱(chēng)重，行OGTT試驗(yàn)，測(cè)FBG、2hPG。次日禁食12h后用以5%水合氯醛腹腔0.6ml/100g腹腔注射麻醉大鼠，腹主靜脈取血，血標(biāo)本迅速離心留取血清，測(cè)定血脂譜及肝功，取血后迅速取出肝臟及脂肪組織，用冰肝素生理鹽水沖洗干凈并用濾紙吸干水分后，稱(chēng)重，計(jì)算內(nèi)臟脂肪相對(duì)含量（VF/W），并留取1.5cm×1.5cm×0.5cm肝組織三塊置入液氮中儲(chǔ)存，后迅速凍存于-70℃冰箱，分別用于RT-PCR法檢測(cè)CHOPmRNA、SREBP-1cmRNA的表達(dá)及WesternBlotting檢測(cè)CHOP蛋白的表達(dá)。另

5、取1cm×1cm×0.5cm肝組織塊浸泡于10%甲醛溶液固定，脫水，石蠟包埋，備做病理切片，待光鏡觀察用。IGT/NAFLDEx組予每日兩次皮下注射Exendin-4（5ug/kg）干預(yù)4周；NGT組及IGT/NAFLDNS組均給予等體積生理鹽水。于干預(yù)4周后全部處死，行以上指標(biāo)檢測(cè)。運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xs）表示，各組間兩兩比較采用單因素方差分析（ANOVA），LSD檢驗(yàn)，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肝臟CHOPmRNA、CHOP蛋白、SREBP-1cmRNA表達(dá)與肝臟脂肪變性程度的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。結(jié)果1.各組大鼠臨

6、床指標(biāo)比較：干預(yù)前，與NGT組比較，IGT/NAFLDNS組、IGT/NAFLDEx組大鼠的體重均升高（464.7833.67vs.554.8819.06）（464.7833.67vs.557.2531.92），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；肝濕重增加（13.111.05vs.16.381.06）（13.111.05vs.16.621.06），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；內(nèi)臟脂肪相對(duì)含量增加（1.830.34vs.8.611.34）（1.830.34vs.8.801.52），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。與IGT/NAFLDNS組比較，IGT/NAFL

7、DEx組以上各參數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），（554.8819.06vs557.2531.92.）（16.381.06vs.16.621.06）（8.611.34vs.8.801.52）。干預(yù)4周后，與同期IGT/NAFLDNS組比較，IGT/NAFLDEx組大鼠體重（614.0025.11vs.487.4424.56）、肝濕重（17.251.04vs.13.380.92）、內(nèi)臟脂肪相對(duì)含量（11.281.69vs.4.031.10）水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。