SD大鼠腦缺血模型建立.doc

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1、1.缺血再灌注后，主要的損傷區(qū)在紋狀體，海馬的A1區(qū)也會出現(xiàn)損傷。缺血再灌注損傷不是很嚴重海馬區(qū)域就沒有明顯的缺血現(xiàn)象但是紋狀體肯定有明顯的缺血現(xiàn)象。缺血1.5小時再灌注后我也做過尼氏染色，海馬區(qū)沒有見到缺血改變，但是紋狀體很明顯。2.#1?大鼠大腦中動脈阻斷實驗的總結(jié)和心得本人現(xiàn)在正在做線栓法大鼠大腦中動脈阻斷實驗（MCAO模型），這方面的資料我查了一些，這個實驗我也作了一段時間，不敢說很專業(yè)了，不過現(xiàn)在基本上我能在15min左右完成手術(shù)，而且手術(shù)過程中不出一滴血，造模后缺血程度基本一致。雖然前面有很多

2、前輩發(fā)了很多MCAO的很專業(yè)的貼子，不過我覺得比較凌亂，現(xiàn)在我把我的心得體會和以前的貼子的精華部分奉獻給大家，希望這會對將要做這個實驗的朋友有一絲的幫助。雖然做實驗總會有郁悶的時候，不過風雨之后總會見到彩虹的，這可以也是我的心得體會。衷心祝福大家能把實驗做的成功、完美?。。?！實驗前準備麻醉劑：水合氯醛（應較好的控制大鼠體溫）保溫：60W白炙燈高度為37cm直接照射能使肛溫保持在37℃栓線的制備：1.取熔點為56℃的固體石蠟一塊，在瓷杯中加熱熔化。直徑為o．24mm、長5cm的魚線一端5mm長的一段，垂直在

3、熔化的石蠟中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄層石蠟可牢固地粘附在魚線一端的表面，其直徑為0.26mm。就這樣，普通的魚線即可變成規(guī)相一致頭端光滑圓鈍的栓線。2.在魚線18mm的位置用涂改液標記一個白色點。TTC的配制：用0.2mol/L磷酸緩沖液（PBS）配成2%TTC溶液（pH7.5）,避光保存。體重與栓線直徑：線栓直徑0.24mm采用的SD大鼠，體重250-300g。實驗方法：動物用10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。仰臥位固定，頸正中線切口，沿胸鎖乳突肌內(nèi)緣分離肌肉和筋膜，分離左側(cè)頸總動脈（

4、CCA）、頸外動脈（ECA）和頸內(nèi)動脈（ICA），在CCA遠心端和近心端及ECA處掛線備用。用微動脈夾暫時夾閉ICA，然后近心端結(jié)扎CCA、ECA。然后在距CCA分叉部4mm處剪一小口，將拴線插入到ICA，這時用繞在CCA遠心端的細線輕輕系牢拴線。（不可過緊，否則近線困難，但松了又會出血。）用眼科鑷輕推拴線，從血管分叉處開始算距離，當插入深度在18mm時（一定要將血管放松至原來狀態(tài),且保證標記點在分叉處,由于標記的是白色的所以很容易看的），緊緊系牢CCA遠心端的細線，此時的關(guān)鍵是動作輕柔，不要使ICA有任

5、何的牽拉，否則栓線會脫出ACA，可能會造成缺血失敗。血管外的栓線不要留得過長，更不要縫在皮外，大鼠醒來后會自己拔出?？p合傷口，單籠飼養(yǎng)觀察。如果需要再灌的話，就把拴線抽出即可，因為腦底有個動脈環(huán)，結(jié)扎一側(cè)頸總動脈大腦不會缺血的。注意事項：1．分離時要層次清楚：正中剪開SD大鼠頸部皮膚，分離皮下結(jié)締組織時會發(fā)現(xiàn)該組織與頸部兩側(cè)鼓泡腺體（很多人誤認為那是甲狀腺）結(jié)合緊密，因此不必分離過于太細，直接在正中兩側(cè)鼓泡腺體之間分離，這樣能不接觸胸鎖乳突肌而直接暴露頸前頸群且不會損傷腺體造成過多出血。下一步是分開頸前肌

6、群，這時候要注意用小鉗子作撐開分離動作要在左右肌肉塊之間而不是一塊肌肉的肌纖維之間，雖然它們看起來很模糊，但這樣能保證不會出現(xiàn)較多條索狀細肌纖維條影響下一步頸內(nèi)動脈的尋找與分離，并且能整塊地向一側(cè)牽開頸前肌群暴露頸動脈鞘。見到頸動脈鞘了則要注意細致分離迷走神經(jīng)，若損傷則可能影響其呼吸而死亡的。2.分離血管時，要盡量將血管剝離的干凈些，這樣在用眼科剪剪口時就不會誤剪外膜（誤剪的話再剪就很容易把口剪大了或者剪斷了，要注意口子越小越好插線），且要剪一個斜行的切口（眼科剪與血管約成45度），這樣在血液剛流出時仍能

7、看上翻的斷口管壁，這樣即容易插入栓線且血管受得了插線時一定的牽拉。當然，切勿牽拉過猛，以免使血管發(fā)生痙攣，導致栓線不能順利進入。3.注意盡量不要損傷在頸內(nèi)頸外分叉下的交感神經(jīng)節(jié)。4.如果你用的是中長效麻醉劑，插線成功后，固定絲線，然后讓其俯臥位，而且稍稍抬高其頸部，才能確保模型成功。5.栓線進入后頸內(nèi)動脈后即可逐漸插入了，有時候很順利一插到底，但有時候在中間就怎么也進不去了，這是因為在血管入顱穿過顱骨時有一個狹窄或者角度。因此，碰上這種明顯阻力時，一定不能盲目向前使力插，越插栓線前端變形越進不去且容易損傷

8、血管。這時候正確的作法是往外抽出較多栓線，也許會有一定的動脈血流出，不必慌，只要順著血管走行調(diào)整一下進線角度輕柔的使勁，一般都能進去，反復試幾次還不行最好換根栓線，很可能前端也經(jīng)變形角度變了！頸內(nèi)動脈的走向為內(nèi)上方,可以用眼科鑷夾住魚線插,但進去后要注意,別太用力,要不血管就要破了6.栓線不能在血管里反復進退，否則及容易造成蛛網(wǎng)膜下腔出血，，而且很容易誤解為模型成功，因為這時的神經(jīng)功能改變也很明顯，但并不是由于栓塞引起的7.進