實時濁度LAMP法檢測豆制品中轉(zhuǎn)基因成分-論文.pdf

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1、FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES實時濁度LAMP法檢測豆制品中轉(zhuǎn)基因成分葉蕾，沈會平，閏鶴，李琳，石磊(華南理工大學(xué)輕工與食品學(xué)院，廣東廣州，510641)摘要通過設(shè)計轉(zhuǎn)基因大豆內(nèi)源基因(Lectin)、外源基因NOS和2個轉(zhuǎn)基因大豆品系(GTS40—3-2。MON89788)特異性LAMP引物，建立快速檢測轉(zhuǎn)基因大豆以及鑒定轉(zhuǎn)基因大豆品系的LAMP體系，并選取國內(nèi)豆制品利用CTAB法進(jìn)行DNA提取，并針對上述基因進(jìn)行PCR和LAMP擴(kuò)增的對比，建立起了檢測大豆制品中轉(zhuǎn)基因成分的定性的LAMP方法。結(jié)果表明

2、：4個LAMP方法均有較好的特異性，除了NOS、GTS40—3—2的檢測限為0．1％外，其他LAMP方法的靈敏度為0．O1％，均能滿足實際檢測要求；在實時濁度LAMP法檢測大豆制品轉(zhuǎn)基因成分的鑒定中，傳統(tǒng)的CTAB法能成功提取大豆粗加工制品的DNA，且DNA純度能夠進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)。利用轉(zhuǎn)基因外引物進(jìn)行的普通PCR結(jié)果與實時濁度LAMP結(jié)果是一致的，說明建立的轉(zhuǎn)基因?qū)崟r濁度LAMP檢測方法有很好的準(zhǔn)確性。關(guān)鍵詞LAMP，豆制品，轉(zhuǎn)基因由于轉(zhuǎn)基因食品存在著對人類健康和安全以及察等過程，而且LAMP反應(yīng)所用設(shè)備簡單、花費少，又對環(huán)境的潛

3、在危害，如轉(zhuǎn)基因植物中毒性物質(zhì)以及殘能滿足快速檢測的需要，特別適用于在一些基層機(jī)構(gòu)留量的微量累積性、過敏癥、轉(zhuǎn)基因作物的本身耐藥推廣應(yīng)用，有著廣泛的應(yīng)用前景。。為了研究與人性、病原體抗藥性、抗性基因的基因漂移、生物多樣性們生活密切相關(guān)的大豆制品中是否含有轉(zhuǎn)基因成分，的破壞等。因此轉(zhuǎn)基因食品一進(jìn)人流通領(lǐng)域，其選取了豆腐、豆腐干、豆奶粉、大豆油、腐乳、醬油等豆安全性問題受到廣泛關(guān)注，對其在流通領(lǐng)域的安全性制品進(jìn)行DNA提取，并設(shè)計相應(yīng)引物進(jìn)行LAMP擴(kuò)評估和控制則顯得尤為重要。盡快建立和完善轉(zhuǎn)基增，建立起了檢測大豆制品中轉(zhuǎn)基因成分的定性

4、因生物和產(chǎn)品的檢測方法，對保證環(huán)境和消費者安LAMP方法。全，對設(shè)置我國的綠色技術(shù)壁壘，打破國外技術(shù)壁壘，目前，LAMP已逐步應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因食品分析中。促進(jìn)我國農(nóng)產(chǎn)品的出口具有十分重要的意義。Lee等。。針對MS8、RF3轉(zhuǎn)化體特異性序列及CaMV環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(1oop—mediatedisothermal35S啟動子、NOS終止子等位點建立了轉(zhuǎn)基因油菜的amplification，LAMP)是2000年由日本的榮研株式會LAMP快速檢測方法，檢測限達(dá)到0．叭％。2010年，的Notomi等人提出的新的核酸擴(kuò)增技術(shù)。它依賴Gua

5、n等用可視LAMP直接檢測2個轉(zhuǎn)基因大豆品于4條特異性引物和一種具有鏈置換活性的DNA聚系GTS40—3—2和MON89788，能夠?qū)崿F(xiàn)對該轉(zhuǎn)基因大合酶(BstDNA聚合酶)在等溫條件下可高效、快速、豆的特異性檢測。2011年Chen等成功建立了特特異性地擴(kuò)增靶序列。在反應(yīng)過程中，DNA不斷地異性檢測7種轉(zhuǎn)基因玉米品系的LAMP法，用凝膠電延伸合成，從脫氧核酸三磷酸基質(zhì)(dNTPs)中析出的泳和添加SYBIGreen2種方法來觀察結(jié)果，并用建立焦磷酸根離子與反應(yīng)溶液中的鎂離子結(jié)合，產(chǎn)生一種的方法對實際樣品的中轉(zhuǎn)基因玉米成分做檢測。我

6、焦磷酸鎂的衍生物，而高效擴(kuò)增的LAMP法生成大量國近年來，也有許多將LAMP方法用于轉(zhuǎn)基因檢測的此衍生物，并呈現(xiàn)白色沉淀。將渾濁度作為鑒定報道。杜正平建立了LAMP法檢測轉(zhuǎn)基因大豆和指標(biāo)，只要用肉眼觀察白色混濁沉淀，就能鑒定擴(kuò)增水稻，并與Q．PCR對比，進(jìn)行特異性和靈敏度實驗，與否，而不需要模板的熱變性，繁瑣的電泳和紫外觀篩選得到2個內(nèi)源基因、4個外源基因檢測的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法引物。柳毅針對轉(zhuǎn)基因大豆的特異基第一作者：博士研究生(石磊為通訊作者)。因CP4一EPSPS設(shè)計引物，建立了LAMP法檢測轉(zhuǎn)基廣州市科技計劃項目(No．11C

7、12080718)；廈門市重大科技計劃項目(No．3502Z20110001)；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資因大豆方法。蘭青闊等建立了針對轉(zhuǎn)基因大豆金資助(No．2012ZZ0083)cp4一epsps基因的LAMP檢測方法，在65℃保溫30收稿日期：2012—06—20，改回日期：2012—07—22rain，通過熒光顯色即可完成對轉(zhuǎn)基因的檢測工作。2012Vo1．38No．8(Total296)結(jié)果顯示，該LAMP方法能夠特異性檢測ep4一epsps13科技有限公司；凝膠成像系統(tǒng)GelDocEQ，美國基因，其檢測靈敏度是常規(guī)定性

8、PCR方法的10倍。BIO．RAD公司。本研究針對大豆內(nèi)源基因Lectin、NOS終止子以1．3實驗方法及轉(zhuǎn)基因大豆GTS40—3-2和MON89788的靶基因，1．3．1DNA提取篩選得到對4套環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增引物，建立轉(zhuǎn)基因成本研究