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《利用ssr分子標記快速鑒定雜交水稻種子純度技術體系的優(yōu)化》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、維普資訊http://www.cqvip.com·●·60·雜交水稻(HYBRIDRICE),2008,23(1):60—63利用SSR分子標記快速鑒定雜交水稻種子純度技術體系的優(yōu)化劉之熙,陳祖武,朱克永,李召華,詹慶才’(1.中南大學研究生院隆平分院,湖南長沙410125;2.湖南省水稻研究所生物技術室,湖南長沙410125)摘要:針對目前SSR分子標記技術快速鑒定雜交水稻種子純度方法商業(yè)化應用的限制因素,從DNA提取、PCR反應體系和程序及凝膠電泳等方面進行了技術體系的優(yōu)化。原方法經(jīng)優(yōu)化后,DNA提取時間從每次5h以上減少
2、到2.5min,PCR反應過程從200min縮短至65min,改聚丙烯酰胺凝膠電泳為瓊脂糖凝膠電泳,電泳時間由3.0—3.5h縮短為1h,且通過減少dNTP、Taq酶的用量,對瓊脂糖凝膠反復利用,大大降低了成本,減少了廢棄物的污染,從而建立了準確、簡單、快速、成本低廉的快速鑒定雜交稻種子純度的技術體系。關鍵詞:雜交水稻;SSR分子標記;純度鑒定;技術體系優(yōu)化中圈分類號:S511;Q75文獻標識碼:A文章編號:1005—3956(2008)叭一0060—04中國是世界上第1個在生產(chǎn)上成功利用水稻雜業(yè)化的因素進行了技術體系的優(yōu)化。
3、種優(yōu)勢的國家。隨著全國雜交水稻種植面積逐年增1SSR分子標記鑒定技術體系的優(yōu)化大,雜交水稻種子年使用量已達到2.5億kg左右¨J,而雜交水稻種子的質(zhì)量糾紛越來越普遍,因1.1DNA提取方法的簡化此種子的質(zhì)量(主要是真實性和純度)檢查和監(jiān)督針對傳統(tǒng)提取方法,如CTAB法、STS法耗費時尤顯重要。間長,提取成本高等問題,提出了簡單的DNA提取SSR(SimpleSequenceRepeats)分子標記具有方法:剪取0.5cm長的水稻幼苗(幼葉或幼莖),放數(shù)量豐富、多態(tài)性高、實驗操作簡單、結(jié)果穩(wěn)定可靠、入96孔PCR板的孔中,每孔加
4、入40L0.25molfL引物序列易交流等優(yōu)點,在遺傳連鎖圖譜的構(gòu)的NaOH,在沸水中煮30s,然后加入40L0.25建、種質(zhì)鑒定和遺傳多樣性的研究~’、基因的molfL的HC1和20I.zL0.5molfL的Tris(pH8.0,定位與分離_6J、品種純度鑒定”等方面得到了含有體積分數(shù)為0.25%的IGEPAL—CA630)的混日益廣泛的應用。國內(nèi)許多科研單位開展了利用合液,在沸水中煮沸2min,用1I.zL進行PCR擴增,SSR技術進行雜交玉米?、雜交油菜¨n、雜交或4cc保存。水稻¨種子純度鑒定的研究,但成本都比較高,1
5、.2PCR反應體系和程序的優(yōu)化在生產(chǎn)上推廣應用比較困難。SSR分子標記應用于為了盡可能降低成本,縮短反應時間,以雜交稻雜交水稻種子純度鑒定產(chǎn)業(yè)化開發(fā),有以下制約因組合兩優(yōu)培九及其母本培矮64S、父本9311為材素:DNA提取操作步驟較多;PCR程序時問長;聚料,RM234為引物,對PCR反應體系和PCR反應程丙烯酰胺凝膠電泳制膠過程復雜,電泳時間長,處理序進行了多因素多水平正交試驗篩選。樣品量有限;成本高(Taq酶、dNTP用量大,DNA提1.2.1試驗因素與水平設計取成本高)。1)DNA擴增反應體積:5,10,15,20I.
6、zL。2)反一方面DNA指紋鑒定技術日趨成熟,在分子水應體系中dNTP總濃度:0.05,0.10,0.15,0.20平上鑒定品種純度成為必然的發(fā)展趨勢;另一方面mmoL/L。3)反應體系中TaqGoldDNA聚合酶用大規(guī)模地應用SSR標記對200株以上的群體進行純度鑒定時,怎樣與國家標準接軌、能否實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化收稿日期:2007—12—10等問題擺在了分子鑒定工作者的面前:必須盡一切基金項目:科技部農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項目(2007GB2D200225)可能降低成本,最好能接近海南種植鑒定的成本。作者簡介:劉之熙(1981一),女
7、,山西長治人,在讀碩士生。電話本文針對現(xiàn)有的SSR標記技術在鑒定雜交水稻種0731—4691351;E—mail:liuzhlxi0505@163.COB。子純度時難以適應商業(yè)化開發(fā)的問題,對限制其商通訊作者:電話:0731—4691351;E—mail:zhanqc@hotmail.eonl。維普資訊http://www.cqvip.com劉之熙等:利用SSR分子標記快速鑒定雜交水稻種子純度技術體系的優(yōu)化·6l·量:0.1,0.2,0.5,1.5單位。4)PCR反應程序:a)1.3電泳方法的選擇94cC預變性4min;94c
8、c1min,55cc1min,72(℃2針對聚丙烯酰胺凝膠制膠復雜、電泳時間長、污rain,35個循環(huán);72℃5rain;b)94c【=預變性4min;染嚴重等弊端,選擇瓊脂糖凝膠進行電泳分離:在擴94c【=30S,55℃30S,72c【=lrain.35個循環(huán);72cE5增