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1、蟲(chóng)草菌絲粉粗多糖含量測(cè)定方法探究蟲(chóng)草多糖是蟲(chóng)草體內(nèi)含量最豐富、最重要的生物活性物質(zhì)之一，蟲(chóng)草多糖是由甘露糖、蟲(chóng)草素、腺昔、半乳糖、阿拉伯糖、木糖精、葡萄糖、巖藻糖組成的多聚糖。本文從以下幾個(gè)方面對(duì)蟲(chóng)草多糖測(cè)定方法進(jìn)行了粗淺的摸索：超聲提取與沸水浴提取的比較；沸水浴時(shí)間不同對(duì)粗多糖提取得率的影響；不同濃度的乙醇沉淀粗多糖對(duì)多糖得率的影響；醇沉不同時(shí)間對(duì)粗多糖得率的影響?，F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下：1材料和方法1.1材料蟲(chóng)草菌絲粉，購(gòu)自西安雙德生物有限公司。1.2試劑葡萄糖（中國(guó)食品藥品檢定研究院）、乙醇、硫酸（固安新欣化工有限公司）、苯酚（天津大學(xué)科威公司）。1.3儀器超聲波
2、清洗器、恒溫水浴鍋、島津UV2550紫外分光光度計(jì)、離心機(jī)。1.4供試品溶液的制備取蟲(chóng)草菌絲粉約l.Og,精密稱(chēng)定，置lOOmL量瓶中，加水80mL,超聲或10CTC熱水浸提，加水定容至100mL,過(guò)濾后收集濾液，取濾液5niL，加4倍體積的乙醇，41靜置，離心收集沉淀，準(zhǔn)確加入25mL水溶解沉淀。1.5粗多糖的測(cè)定”“苯酚硫酸法[3]1.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取濃度為0.lmg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.20、0.40.0.60.0.80.l.OmL,分別置于10mL具塞試管中,各加蒸館水使體積為1.OmL,再加苯酚溶液(5%)l.OmL,搖勻,迅速滴加濃硫酸
3、5.OmL,振蕩搖勻后置沸水浴中加熱15min,取出具塞試管，迅速冷卻至室溫，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。同時(shí)以蒸館水如上法配制空白液。以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液中葡萄糖的絕對(duì)質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，求得直線回歸方程。1.5.2樣品溶液測(cè)定吸取按1.4方法制備的供試品溶液適量，置于10mL具塞試管中，按1.5.1法自“各加蒸館水使體積為l.OmL,&hellip；&hellip；”至u&hellip；&hellip；在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度”操作，測(cè)定供試品溶液吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所確定的回歸方程,計(jì)算供試品溶液中粗多糖的含量。2結(jié)果2
4、.1超聲不同時(shí)間對(duì)粗多糖提取率的影響取蟲(chóng)草菌絲粉約l.Og,精密稱(chēng)定，置lOOniL量瓶中，加水80mL,超聲20min>40min>60min>90min后過(guò)濾，濾液加4倍無(wú)水乙醇，4。（3靜置6h后，離心收集沉淀，準(zhǔn)確加入25mL水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分別測(cè)定粗多糖含量（結(jié)果如表l）o從表1可知，超聲60min,所提取的粗多糖含量達(dá)到最大值，隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，含量增加幅度不大，并且有減小的趨勢(shì)。原因可能是由于超聲波具有較強(qiáng)的機(jī)械剪切作用，長(zhǎng)時(shí)間的作用會(huì)使大分子的多糖斷裂，從而影響多糖得率［4］。故采用超聲提取粗多糖時(shí)，超聲時(shí)間選擇在60min為宜。2.210
5、0°C熱水浸提不同時(shí)間對(duì)粗多糖提取率的影響取蟲(chóng)草菌絲粉約l.Og,精密稱(chēng)定，置lOOniL量瓶中，加水80mL,100°C熱水中浸提lh、2h、3h、5h、8h,濾液加4倍無(wú)水乙醇，靜置6h后，離心收集沉淀，準(zhǔn)確加入25mL水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分別測(cè)定粗多糖含量（結(jié)果見(jiàn)表2）從上圖可知，熱水浸提5h,粗多糖得率達(dá)到最大值，隨著水浴時(shí)間的延長(zhǎng)，得率增加緩慢，故從節(jié)省檢測(cè)時(shí)間及節(jié)約能源角度考慮，采用水浴浸提，時(shí)間應(yīng)控制在5h左右為宜。2.3醇沉不同時(shí)間對(duì)粗多糖提取率的影響取蟲(chóng)草菌絲粉約l.Og,精密稱(chēng)定，置100mL量瓶中,100°C熱水中浸提5h后，濾液加4倍無(wú)水
6、乙醇，4工靜置2h、4h、6h、8h、12h后，離心收集沉淀，準(zhǔn)確加入25mL水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分別測(cè)定粗多糖含量（結(jié)果見(jiàn)表3）。從上圖可知，隨著沉淀時(shí)間的延長(zhǎng)，粗多糖的得率增加,無(wú)水乙醇沉淀6h后，得率增加緩慢，故乙醇沉淀時(shí)間選擇在6h為宜。2.4醇沉濃度對(duì)粗多糖提取率的影響取蟲(chóng)草菌絲粉約l.Og,精密稱(chēng)定，置100mL量瓶中,100°C熱水中浸提5h后，濾液加4倍體積的濃度分別為60%、85%、95%、100%乙醇，4°C靜置6h后，離心收集沉淀，準(zhǔn)確加入25mL水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分別測(cè)定粗多糖含量（結(jié)果如表4）。從表4可知，乙醇濃度在100%,粗
7、多糖得率最高，隨著乙醇濃度的減少，得率下降。故醇沉濃度應(yīng)選擇在100%為最佳。2.5顯色穩(wěn)定性取蟲(chóng)草菌絲粉約l.Og,精密稱(chēng)定，置100mL量瓶中,100°C熱水中浸提5h后，濾液加4倍無(wú)水乙醇，41靜置6h后，離心收集沉淀，準(zhǔn)確加入25mL水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法，加入規(guī)定量苯酚、硫酸顯色，每隔30min測(cè)定吸光度。結(jié)果見(jiàn)下表：從表5可知，供試品溶液加入規(guī)定量的苯酚、硫酸顯色后，在2h內(nèi)測(cè)定，粗多糖含量結(jié)果較為穩(wěn)定。3結(jié)論由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，在進(jìn)行蟲(chóng)草菌絲體粗多糖提取時(shí)，超聲提取雖然較沸水浴提取節(jié)省時(shí)間，但前者粗多糖得率比后者低很多，故沸水浴提取
