光溫條件對煙葉唇柱苣苔葉片離體培養(yǎng)的影響-論文.pdf

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1、現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技2014年第11期林業(yè)科學(xué)光溫條件對煙葉唇柱苣苔葉片離體培養(yǎng)的影響黃賽潘梅戚華莎王景飛呂德任(海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園林花卉研究所，海南海口571100)摘要以煙葉唇柱苣苔葉片為外植體，MS為基本培養(yǎng)基，研究了光照強(qiáng)度和溫度對煙葉唇柱苣苔葉片離體培養(yǎng)的影響，以期篩選出各培養(yǎng)階段最佳光照強(qiáng)度和溫度。結(jié)果表明，葉片不定芽誘導(dǎo)的最佳光照強(qiáng)度是1000Ix，最佳溫度為28℃，40d不定芽誘導(dǎo)率95．83％；不定芽增殖和生根的最佳光照強(qiáng)度是1500lx，最佳溫度為28℃，40d不定芽增殖倍數(shù)迭7．24倍，生根率100．0o％，平均生根數(shù)多達(dá)21-33條。關(guān)鍵詞煙葉唇柱苣苔；溫

2、光條件；葉片；不定芽；組織培養(yǎng)中圖分類號Q949．778．4；Q943．1文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號1007-5739(2014)11-0155—02煙葉唇柱苣苔(ChiritaheterotrichaMen"．)是苦苣苔科唇葉片(約0．5cmxO．5cm)以葉背接入MS+6一BA0．1mg／L+NAA柱苣苔屬多年生草本，生于海拔約430Ilfl的山谷林中或溪0．1mg／L培養(yǎng)基翻，置于溫度28qC、不同光照強(qiáng)度的培養(yǎng)室邊石上川，是海南省特有的野生花卉，具有極大的開發(fā)潛力。中，培養(yǎng)40d后統(tǒng)計(jì)葉片不定芽誘導(dǎo)率和平均不定芽數(shù)。湯正輝對煙葉唇柱苣苔葉片不定芽的分化及生根進(jìn)行了(2)

3、溫度對葉片不定芽誘導(dǎo)的影響。取無菌植株小葉片研究121，但有關(guān)光照及溫度等環(huán)境條件在其離體培養(yǎng)中的影(約0．5cmxO．5cm)以葉背接入MS+6一BA0．1mg／L+NAA0．1響未見有報(bào)道。本試驗(yàn)以煙葉唇柱苣苔無菌葉片作為試驗(yàn)材mg／L培養(yǎng)基上，置于光照強(qiáng)度1500Ix、不同溫度的培養(yǎng)室料，研究了不同光照強(qiáng)度和溫度對葉片不定芽的分化、增殖中，40d后統(tǒng)計(jì)葉片不定芽誘導(dǎo)率和平均不定芽數(shù)。以及生根的影響．以期篩選出各培養(yǎng)階段最為合適的光照1．3．3不定芽的增殖。強(qiáng)度和溫度(1)光照強(qiáng)度對不定芽增殖的影響。將單個不定芽接1材料與方法入MS+6一BA0．5mg／L+NAA0．

4、1mg／L培養(yǎng)基中，置于溫度1．1試驗(yàn)材料28qC、不同光照強(qiáng)度的培養(yǎng)室中，培養(yǎng)40d后統(tǒng)計(jì)不定芽植株采自海南省保亭縣，取幼葉作為外植體材料。供試增殖倍數(shù)。植物生長調(diào)節(jié)劑為6-BA(6-芐基腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)。(2)溫度對葉片不定芽增殖的影響。將單個不定芽接入基本培養(yǎng)基為MS。MS+6一BA0．5mg／L+NAA0．1mg／L培養(yǎng)基中．置于光照強(qiáng)度1．2試驗(yàn)設(shè)計(jì)1500lx、不同溫度的培養(yǎng)室中，40d后統(tǒng)計(jì)不定芽增殖倍數(shù)。以MS為基本培養(yǎng)基，根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康奶砑又参锷L調(diào)節(jié)1．3．4生根培養(yǎng)。劑6-BA和NAA，附加白糖30g／L、卡拉膠9g／L，滅菌前pH(1)光照

5、強(qiáng)度對不定芽生根的影響。將高度達(dá)到1．2cm值為5．8，配制分裝后，于溫度121oC、壓力0．14MPa高溫的不定芽接入MS+NAA0．5mg／L培養(yǎng)基中．置于溫度28℃、高壓下滅菌20min。材料接種后移入培養(yǎng)室，光照強(qiáng)度設(shè)置不同光照強(qiáng)度的培養(yǎng)室中，培養(yǎng)30d后統(tǒng)計(jì)不定芽生根率、1000、1500、2000lx等3個處理，溫度設(shè)置25、28、31℃3生根數(shù)、株高。個處理，光照時間8h／d，每個處理接種8袋，每袋3個材料，(2)溫度對不定芽生根的影響。將高度達(dá)到1．2cm的不3次重復(fù)，定期觀察記錄，培養(yǎng)40d后統(tǒng)計(jì)結(jié)果。定芽接入Ms+NAA0．5mg／L培養(yǎng)基中，置于光照

6、強(qiáng)度1500Ix、1．3試驗(yàn)方法不同溫度的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，30d后統(tǒng)計(jì)不定芽生根率、生根1．3．1無菌材料的建立。將煙葉唇柱苣苔的幼嫩葉片在自數(shù)、株高和最長根。來水中洗去污物，用棉花蘸洗潔精液擦拭葉片兩面，沖洗干1．4統(tǒng)計(jì)方法凈后移入超凈工作臺，先用75％酒精浸泡10s，再用0．2‰計(jì)算公式為：不定芽誘導(dǎo)率(％)=誘導(dǎo)出芽葉片數(shù)／接種HgCI2溶液浸泡3min，無菌水沖洗3次，最后用2％次氯酸葉片數(shù)xl00，平均不定芽數(shù)=不定芽總數(shù)／誘導(dǎo)出芽葉片數(shù)．鈉溶液浸泡15rain，無菌水沖洗5次。將葉片切成1cmx1cm不定芽增殖倍數(shù)=培養(yǎng)40d不定芽總數(shù)／接種不定芽數(shù)，生見方的小

7、塊，以葉背朝下接種于MS+6一BA0．5mg／L+NAA根率(％)=生根植株數(shù)／接種植株數(shù)xl00，生根數(shù)=植株生根總數(shù)／生根植株數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果均進(jìn)行方差分析，F(xiàn)測驗(yàn)顯著后用0．1mg／L培養(yǎng)基上。接種15d后，葉面開始膨大隆起。25d開始有小芽點(diǎn)萌動，40d在葉片邊緣、主葉脈基部和葉面處均新復(fù)極差法(SSR)進(jìn)行多重比較，統(tǒng)計(jì)結(jié)果均為99％水平。2結(jié)果與分析分化出不定芽。取不定芽葉片作為研究試驗(yàn)材料。2．1不定芽的誘導(dǎo)1．3．2不定芽的誘導(dǎo)。(1)不同光照強(qiáng)度對煙葉唇柱苣苔葉片不定芽誘導(dǎo)的影(1)光照強(qiáng)度對葉片不定芽誘導(dǎo)的影響