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《腦心肌炎病毒（EMCV）RT-PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用-論文.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、2013年7月中國比較醫(yī)學(xué)雜志July，2013第23卷第7期CHINESEJOURNALOFCOMPARATIVEMEDICINEV01．23No．7腦心肌炎病毒(EMCV)RT—PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用王吉，付瑞，衛(wèi)禮，李曉波，馮育芳，鞏薇，王淑菁，岳秉飛，賀爭鳴(中國食品藥品檢定研究院、國家實(shí)驗(yàn)動物微生物、遺傳檢測中心，北京100050)【摘要】目的建立腦心肌炎病毒(EMCV)RT—PCR檢測方法，應(yīng)用于長爪沙鼠、小鼠等實(shí)驗(yàn)動物EMCV的檢測。方法根據(jù)已發(fā)表的EMCVVP1基因序列設(shè)計(jì)合
2、成引物。建立RT·PCR方法，并對方法的特異性、敏感性、穩(wěn)定性等進(jìn)行驗(yàn)證。用該方法檢測62只長爪沙鼠、l2只小鼠。結(jié)果建立的EMCVRT-PCR檢測方法特異、敏感、穩(wěn)定。以EMCVRNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，所能檢測RNA最小模板濃度為4．1pg／L，可檢測病毒最小滴度為lO一mL一。經(jīng)RT-PCR檢測，62只沙鼠均為陰性；12只小鼠中有1只EMCV核酸陽性，測序結(jié)果與GenBank中EMCV標(biāo)準(zhǔn)株核苷酸序列進(jìn)行比對，其同源性為85％。結(jié)論建立的腦心肌炎病毒(EMCV)RT—PCR檢測方法特異、敏感、穩(wěn)
3、定，可用于長爪沙鼠、小鼠等實(shí)驗(yàn)動物EMCV的檢測。【關(guān)鍵詞】腦心肌炎病毒；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；長爪沙鼠；小鼠【中圖分類號】R一332【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1671-7856(2013)07-0044-06doi：10．3969．j．issn．1671．7856．2013．07．O11DevelopmentandpreliminaryapplicationofRT-PCRmethodfordeterminationofencephalomyocarditisvirusWANGJi，F(xiàn)URui，
4、WEILi，LIXiao-bo，F(xiàn)ENGYu-fang，GONGWei，WANGShu~ing，YUEBing-fei，HEZheng—ruing，(NationalInstitutesforfoodanddrugControl，NationalCenterforqualityofLaboratoryAnimal，Bering100050，China)【Abstract】ObjectiveTodevelopaRT-PCRmethodfordeterminationofEncephalomyocard
5、itisvirus(EMCV)inMongoliangerbilsandLaboratorymice．MethodsTheprimersweredesignedandsynthesisedaccordingtothepublishedEMCVspecificsequencesofVPIgene．RT-PCRmethodisestablished，carriesonthespecificity，sensitivity，stabilitytest．Themethodisusedtodetected62M
6、ongoliangerbilsand12mice．ResultsThedevelopedRT—PCRmethodisgoodinspecificity，ensitivity，stability；anditsminimumdetectionlimitusingtherecombinantplasmidcontainingEMCVgeneasatemplatewas4．IPg／ttL．a(chǎn)ndthelowestdetectionvirustiteris10～ml～．The62Mongoliangerbil
7、safterRT-PCRdetectionwerenegative；The12miceafterRT-PCRdetection，therewereoneEMCVpositive，comparedwiththeEMCVinGenebank，Thehomologiesinnucleotidesequenceofonepositivemiceis85％；therewere5micecanbedetectedEMCVinthebodyofthe6micebyartificialinfectionEMCV．C
8、onclusionThedevelopedRT-PCRmethodisgoodinspecificity，ensitivity，stability，canbeusedindetectingtheEMCVinlaboratoryanimal，suchasMongoliangerbilsandmice．【Keywords】Encephalomyocarditisvirus；RT-PCR；Mongoliangerbil；Mouse【基金項(xiàng)目】實(shí)驗(yàn)動物新品種的種群建立與質(zhì)量標(biāo)
