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《絮凝劑產(chǎn)生菌克雷伯氏桿菌的篩選、鑒定及培養(yǎng)條件優(yōu)化-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第14卷第18期2014年6月科學技術與工程Vo1．14No．18Jun．20141671—1815(2014118—0177—06ScienceTechnologyandEngineering⑥2014Sci．Tech．Engrg．絮凝劑產(chǎn)生菌克雷伯氏桿菌的篩選、鑒定及培養(yǎng)條件優(yōu)化韓宴秀莫創(chuàng)榮周云新鄧國龍周柳香(廣西大學環(huán)境學院，南寧530004)摘要采用常規(guī)細菌分離方法從木薯淀粉黃漿廢水中篩選得到一株微生物絮凝劑產(chǎn)生菌，編號為M2。經(jīng)過形態(tài)學特征、生理生化反應試驗和16SrDNA基因序列分析鑒定該菌株為克雷伯氏桿菌，命名為Klebs
2、ieUasp．M2。通過單因素實驗對菌株M2培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，結果表明最佳培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)基初始pH值、培養(yǎng)溫度及搖床轉速分別為查氏培養(yǎng)基、5、30℃及150r／min。與大部分微生物絮凝劑產(chǎn)生菌上清液表現(xiàn)出絮凝性不同，菌株M2的菌體本身表現(xiàn)出絮凝活性；經(jīng)過使用超聲波破碎儀證明菌體本身具有絮凝活性，最佳絮凝率達到93．20％，具有易于運輸、便于使用的優(yōu)點。菌株M2在以蔗糖作為碳源、KNO作為氮源的情況下絮凝活性最好。關鍵詞木薯淀粉廢水微生物絮凝劑產(chǎn)生茵培養(yǎng)條件16SrDNA中圖法分類號Q939．99；文獻標志碼A微生物絮凝劑(micro
3、bialflocculatants，MBF)是1材料和方法利用生物技術獲得的一種安全、易降解的新型水處理絮凝劑¨J。從來源來看，微生物絮凝劑主要有41．1材料種類型：直接利用微生物細胞、微生物細胞壁提取菌種來源：采自南寧市某淀粉廠2號黃漿池中物、微生物細胞代謝產(chǎn)物以及通過克隆技術所獲得經(jīng)過特殊處理的二次木薯淀粉黃漿廢水。的絮凝劑J。由于微生物絮凝劑可以克服無機高分離培養(yǎng)基：使用通用發(fā)酵培養(yǎng)基，pH為自然，分子絮凝劑處理效率不佳、耗費大等缺點和人工合121℃、高壓滅菌20minJ。成有機高分子絮凝劑如聚丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性和初篩培養(yǎng)基：為
4、上述不加瓊脂的分離培養(yǎng)基?！叭隆毙墓逃腥毕?，無二次污染、可生物降解種子培養(yǎng)液：在試管中加入10mL液體通用發(fā)和安全可靠，最終能實現(xiàn)污染零排放，因此越來越受酵培養(yǎng)基，塞好棉塞，121oC，高壓滅菌20min。冷到關注，。卻至室溫后在超凈臺中操作，加入0．1mL目的菌株目前就國內形勢來看，制約微生物絮凝劑發(fā)展的菌液，混勻，放人恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d。3d后的關鍵問題在于生產(chǎn)成本過高和產(chǎn)量低，所以篩選循環(huán)以上操作，將此培養(yǎng)液作為產(chǎn)絮凝劑接種時的高效絮凝劑產(chǎn)生菌，并且提高其絮凝劑產(chǎn)量變得極種子液。其重要；同時這也是開發(fā)和系統(tǒng)研究微生物絮凝劑
5、1．2方法關鍵的第一步J。實驗從二次木薯黃漿淀粉廢水1．2．1絮凝率的測定中篩選出高效生物絮凝劑產(chǎn)生菌M2，此菌株對木薯向50mL具塞比色管中加入0．2g高嶺土，再黃漿淀粉廢水具有較強的適應能力，能直接利用廢加入45mL蒸餾水，上下翻轉5次后加入1mL1％水作為營養(yǎng)來源，解決了培養(yǎng)基成本高的問題。本CaC1：溶液和1mL目的菌株的含菌培養(yǎng)液，加蒸餾實驗經(jīng)過形態(tài)學特征、生理生化反應試驗和16SrD-水至比色管50mL刻度線，勻速上下翻轉15次，每NA基因序列分析對菌株進行鑒定，并對該菌株的次翻轉以氣泡上升完畢為準，靜置10min。其他條最
6、佳培養(yǎng)條件進行了研究。件相同，以蒸餾水代替含菌培養(yǎng)液作為空白。于液面下固定位置吸取10mL上清液，在721型分光光2014年2月14日收到南寧市科學研究與度計550nix1的波長下測定上層清液吸光度，通過吸技術開發(fā)計劃項目(20125257)資助光度的減少定量表示絮凝率。用絮凝率(％)表示通信作者簡介：莫創(chuàng)榮，男，副教授，博士。E—mail：mochuangrong@絮凝活性，其計算公式如下6]：163．corn。178科學技術與工程14卷的大小來確定最佳培養(yǎng)基和碳氮源。％=_×l。。％。1．3．2培養(yǎng)基初始pH值和搖床轉速對M2絮凝活
7、式中：A為空白水樣上清液在550nm的吸光值性的影響OD。nm；為待測水樣上清液在550rtm的吸光值用最佳碳氮源培養(yǎng)基作為測試培養(yǎng)基，培養(yǎng)基OD。nm；／z為投加絮凝劑前后水樣中懸浮物的去pH值分別調節(jié)至3．0～9．0；搖床轉速分別調節(jié)至除率。80r／min、150r／min、200r／min和240r／min。1．2．2微生物絮凝劑產(chǎn)生菌的初篩實驗1．3．3培養(yǎng)溫度對M2絮凝活性的影響實驗篩選純種菌種的流程為：采樣預處理一富將恒溫振蕩器的水浴溫度分別調節(jié)至25℃、集培養(yǎng)一澆注平板法及平板劃線法分離微生物一挑30cc、35℃和40℃定
8、時取樣，其他條件采用以上選菌落、獲取單菌落，平板劃線法傳代培養(yǎng)純化一純實驗得出的最佳培養(yǎng)條件。種菌種的保存J。按照以上流程篩選出純種菌種2結果與分析后，用肉眼觀察的方法，觀察靜置后的高嶺土懸浮液是否能形成絮
