生物制藥工藝學(xué)實(shí)驗(yàn).docx

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1、生物制藥工藝學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)（12個(gè)實(shí)驗(yàn)，36學(xué)時(shí)）焦飛生物技術(shù)教研室實(shí)驗(yàn)一　健胃消食片配方及片劑的制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握壓片機(jī)壓片的方法及影響片劑成型的主要因素；2.學(xué)會(huì)片劑處方的調(diào)配。二、實(shí)驗(yàn)材料和儀器太子參，陳皮，山藥，麥芽（炒），山楂，蔗糖粉，糊精，硬脂酸鎂，粉碎機(jī)，干燥箱，制片機(jī)三、實(shí)驗(yàn)原理健胃消食片為內(nèi)科傷食類(lèi)非處方藥品，主治健胃消食，用于脾胃虛弱，消化不良，脾胃虛弱所致的食積，癥見(jiàn)不思飲食，暖腐酸臭，脘腹脹痛。健胃消食片的配方如下，太子參228.6g，陳皮22.9g，山藥171.4g，麥芽（炒）171.4g，山楂114.3g，蔗糖糊

2、精適量，值得片劑為淡棕黃色的片或薄薄膜片，氣略香，味微甜，酸。制作方法：太子參半量與山藥粉碎成細(xì)粉，其余陳皮三味藥及剩余的太子參置于燒杯，加3倍量水，煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次煎液，減壓濃縮至浸膏，干燥。將蔗糖粉糊精和生藥粉以3：1：1的混合粉與浸膏混合制成軟材，軟材的軟硬應(yīng)適當(dāng)，以“手握成團(tuán)，輕壓則散”為宜。采用擠出制粒的方法制成顆粒，顆粒在60-80攝氏度干燥，干燥時(shí)應(yīng)逐漸升溫，以免因顆粒表面干燥過(guò)快結(jié)成硬殼而影響內(nèi)部水分的蒸發(fā)。顆粒整粒后加入1％硬脂酸鎂混合后壓片。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.稱(chēng)取太子參22.8g，陳皮2.3g，山藥17.1g，山藥

3、17.1g，麥芽17.1g，山楂11.4g2.太子參山藥用粉碎機(jī)粉成細(xì)粉。3.將上述藥材放入燒杯中，加入3倍量的水，煎煮半小時(shí)，重復(fù)兩次，將上清液合并，減壓濃縮至浸膏，將所得浸膏放入烘箱中80度干燥。4.將蔗糖粉糊精和干燥后的粉末以3：1：1的比例混合制成顆粒軟材，將軟材放入烘箱中逐漸升溫干燥。5.干燥后的軟材加入1％硬脂酸鎂放入壓片機(jī)中壓片。實(shí)驗(yàn)二　溶菌酶結(jié)晶的制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握鹽析法提取蛋白質(zhì)的原理和過(guò)程；1.學(xué)會(huì)溶菌酶的結(jié)晶和精制方法。二、實(shí)驗(yàn)材料與儀器新鮮雞蛋，氯化鈉，1mol/L氫氧化鈉溶液，醋酸緩沖液，燒杯，玻璃棒，布氏漏斗

4、，干燥箱。三、實(shí)驗(yàn)原理溶菌酶又稱(chēng)細(xì)胞壁質(zhì)酶或N—乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是一種國(guó)內(nèi)外很緊銷(xiāo)的生化物質(zhì)，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床。具有多種藥理作用，能抗感染、消炎、消腫、增強(qiáng)體內(nèi)免疫反應(yīng)等，有抗菌的作用，常用于五官科多種粘膜炎癥，皮膚帶狀瘡疹等疾病。是優(yōu)良的天然防腐劑，可用于食品的防腐保鮮。尤其重要的是近年來(lái)溶菌酶已成為基因工程及細(xì)胞工程必不可少的工具酶。四、實(shí)驗(yàn)步驟（1）收集雞蛋清將新鮮雞蛋兩端各敲一個(gè)小洞，使蛋清流出（最好是新生的雞蛋、PH值不得低于8，否則不能使用），按其體積的兩倍量加入水，輕輕攪拌5min，使蛋清溶液的稠度均勻，注意在攪拌過(guò)程中

5、不能起泡，攪拌不宜過(guò)快、攪拌棒應(yīng)光滑等，以防蛋白質(zhì)變性而影響溶菌酶產(chǎn)品的得率及質(zhì)量，最后用雙層細(xì)紗布濾除蛋清溶液中的臍帶塊及碎蛋殼等。（2）加入氯化鈉按每100ml蛋清溶液加入2g.氯化鈉的比例，白蛋清溶液中慢慢加入氯化鈉細(xì)粉，邊加邊攪拌，促使氯化鈉細(xì)粉及時(shí)溶解，以避免局部濃度過(guò)高或沉淀于容器底部，否則會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性而產(chǎn)生大量的白色沉淀。（3）粗制溶菌酶加完氯化鈉細(xì)粉后，再用1mol/L的氫氧化鈉溶液小心地將上述蛋清溶液的PH值調(diào)節(jié)到10.8。在用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)蛋清溶液PH值時(shí)，用膠頭滴管將其逐漸滴入并不斷攪拌以免局部過(guò)堿而導(dǎo)致蛋白質(zhì)的

6、變性，從而影響溶菌酶的得率和質(zhì)量。為加速溶菌酶的結(jié)晶過(guò)程，可再加入適量的溶菌酶結(jié)晶體作為晶種。低溫下靜置數(shù)天，溶菌酶結(jié)晶將慢慢析出，于72~96h達(dá)到最高產(chǎn)率。待結(jié)晶完全后，傾去上清液并用布氏漏斗濾出結(jié)晶，即可得到粗制的溶菌酶晶體。（4）精制溶菌酶將制得的粗結(jié)晶用PH值4.6的醋酸溶解，然后讓酶液靜置2h，接著過(guò)濾除去不溶物，收集濾液并量出體積，按100ml濾液加5g氯化鈉的比例加入（加入方法與第二步加入氯化鈉的方法相同）。然后用1mol/L的氫氧化鈉溶液緩慢地將其PH值調(diào)節(jié)到10.8后，低溫下靜置結(jié)晶。為加速結(jié)晶過(guò)程可向酶液中加入溶菌酶晶種

7、，待結(jié)晶完全后再傾去上清液，用布氏漏斗過(guò)濾可得溶菌酶結(jié)晶，如純度不夠，可重復(fù)操作提純，直至達(dá)到所需要的純度為止，結(jié)晶于30~40°:烘干后即得溶菌酶產(chǎn)品。（5）包裝存貯產(chǎn)品應(yīng)裝于玻璃或陶瓷容器中，置于陰冷處保存，以免溶菌酶受熱后失去活性。注意事項(xiàng)（1）整個(gè)過(guò)程只能在玻璃或陶瓷容器中進(jìn)行，不可用金屬容器，以免酶失活而影響產(chǎn)品的得率及質(zhì)量。（2）操作的全過(guò)程要在低溫下進(jìn)行（10°以下），防止原料變質(zhì)和酶失活。（3）第三步中加入溶菌酶晶種的具體操作是將溶菌酶晶體均勻地懸浮于少量的PH值為10.8，濃度為5%氯化鈉溶液中，取幾滴加入到調(diào)好的PH值和氯

8、化鈉濃度的蛋清液內(nèi)，再置低溫處結(jié)晶。實(shí)驗(yàn)三纖維素酶活力的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解纖維素酶的種類(lèi)和測(cè)定原理，以及纖維素酶的作用特性；2.掌握3,5-二硝基水楊酸（DN