quanta sc培訓教程

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1、多功能細胞分析系統(tǒng)QuantaSC培訓教程美國貝克曼庫爾特有限公司生命科學部細胞組學QuantaSC用戶培訓大綱預期目的：通過第一次培訓后能夠達到以下要求：1，了解QuantaSC的基本原理及不同于其它流式細胞儀的特點2，了解QuantaSC的基本結(jié)構(gòu)、開關(guān)機程序及常規(guī)保養(yǎng)3，了解CellLabQuantaSC軟件結(jié)構(gòu)并能運用各項功能4，掌握DNA檢測的原理及基本要點，熟悉基本的標本制備過程，能夠進行方案設(shè)計并能檢測標本5，掌握細胞存活率檢測的原理及標本制備和檢測過程6，掌握單標記及多標記免疫熒光標記的原

2、理及基本要點，熟悉基本的標本制備過程，能夠進行方案設(shè)計并能夠檢測標本7，了解并掌握儀器質(zhì)控的幾個步驟以及相關(guān)質(zhì)控品8，了解流式細胞儀的基本應用培訓內(nèi)容及課時安排(每半天為一個教學課時)第一課時：1，QuantaSC的基本原理及應用概述2hr結(jié)構(gòu)及各部件功能：激光，汞弧燈，流動室，注射泵，鞘液，光學系統(tǒng)，光電倍增管，電壓及增益，放大方式，閾值，檢測信號種類，熒光染料種類，分色方式，道數(shù)，直方圖等應用：科研2，硬件及軟件介紹第二課時3，開機步驟，按照操作向?qū)崾具M行，F(xiàn)LOW_CHECK原理及光路與流路校準操

3、作，練習調(diào)電壓，熟悉電壓變化引起的信號強度變化4，練習建立方案第三課時5，免疫熒光(單標記)：原理，方案，同型對照設(shè)定，Q_PREP或OptiLyse_C使用，CytoTrol或ImmunoTrol及全血標本制備，檢測，練習調(diào)電壓(2~3hr)第四課時6，免疫熒光(雙標記)：方案，同型對照設(shè)定，顏色補償原理及補償設(shè)定，分別練習手動和自動調(diào)節(jié)，全血標本練習(2~3hr)第五課時7，免疫熒光(三標記)，示范及練習(1~2hr)8，質(zhì)控品及質(zhì)控介紹：FlowCheck，F(xiàn)lowSet，CytoTrol，Immu

4、noTrol9，總結(jié)及試劑介紹第六-七課時10，DNA檢測及分析：檢測原理，方案設(shè)計，標本制備（包括利用488nm激發(fā)的PI和紫外激發(fā)的DAPI），標本檢測11，數(shù)據(jù)保存和分析12，熟悉軟件中的其它選項13，應用介紹流式細胞術(shù)(FlowCytometer)流式細胞術(shù)(FlowCytometry,FCM)是利用流式細胞儀對細胞等生物粒子的理、化及生物學特性進行分析的方法。它集中了單可隆抗體技術(shù)、激光技術(shù)、計算機技術(shù)、細胞化學和免疫化學技術(shù)。利用流式細胞儀可以對細胞等生物粒子的理化及生物學特性(細胞大小、DN

5、A含量、細胞表面抗原表達等)進行定量、快速、客觀、多參數(shù)相關(guān)的檢測。QuantaSC概述QuantaSC是貝克曼庫爾特公司最新推出的新型的多功能流式細胞分析系統(tǒng)，QuantaSC是第一臺也是迄今唯一的一臺具有庫爾特體積參數(shù)的流式細胞分析系統(tǒng)，它同時能檢測3色熒光信號，而且還有側(cè)向散射光信號。QuantaSC能不依賴熒光微球進行單平臺絕對計數(shù)，實現(xiàn)了在流式細胞系統(tǒng)上無成本的單平臺絕對計數(shù)，另外還有兩個獨特的熒光參數(shù)：熒光濃度和熒光表明密度。非常適合細胞學的科學研究。為了使其應用領(lǐng)域更加廣泛，QuantaSC

6、配置有2個光源，488nm的激光和汞弧燈，而且汞弧燈有365、405和435的激發(fā)波段，QuantaSC的濾片可根據(jù)選擇的染料不同隨時更換，應用更加靈活。QuantaSC的液流傳輸系統(tǒng)是注射泵，所以能精確測量通過樣本的濃度。QuantaSC工作原理光源：激光(488nm固體激光)，汞弧燈（365nm，405nm，435nm）流動室：專利的三角形流動室液流傳輸系統(tǒng)：注射泵細胞：單細胞懸液檢測器：光電倍增管(PMT)，光電二極管檢測信號：電子體積（EV），散射光(SS)，熒光信號(FL1~FL3)統(tǒng)計分析及結(jié)

7、果輸出：計算機（WindowsXP）光源：激光，汞弧燈多種激發(fā)光決定了應用的多樣性。汞弧燈的366nm是激發(fā)DAPI和Hoechst等用于DNA倍體分析的理想光源，405和435nm可用于檢測CFP。488nm激光的功率可調(diào)，2-22mW，可根據(jù)檢測信號的不同隨時調(diào)整，488nm激發(fā)的染料有FITC，PE，PI，7AAD，SyberGreen，Syto9，PC5，PC7，GFP，YPF，RFP等。流動室：專利的三角形流動室當液流噴入流動池時，位于三個池角的鞘液因具較高剪切力逼使單細胞液束聚集于池中央，使得

8、單細胞流束更為穩(wěn)定。這點在進行細胞周期檢測分析時尤為重要。液流傳輸系統(tǒng)：注射泵QuantaSC采用了精確的Hamilton注射器將細胞懸液準確注入流動室并精確計算注入體積，從而精確計算出樣本濃度，QuantaSC可46測細胞濃度范圍為3x10到2x10cells/ml，在其它的流式細胞儀上希望單平臺得出絕對計數(shù)需要加標準熒光微球。細胞：單細胞懸液細胞在進入流動室之前已經(jīng)經(jīng)過流體力學聚焦形成分散獨立的顆粒，超穩(wěn)定液流系統(tǒng)，精確的