lipofiter轉(zhuǎn)染試劑中文說明書

《lipofiter轉(zhuǎn)染試劑中文說明書》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、LipoFiterTM脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑LipoFiterTM產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱規(guī)格HB-TRLF-200200ulLipoFiterTM脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑HB-TRLF-10001mlHB-TRLF-50005ml保存條件：4℃保存，一年有效。-20℃保存，三至五年有效,反復(fù)凍融不影響產(chǎn)品質(zhì)量。LipoFiterTM簡介LipoFiterTM脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑(LipoFiterTMLiposomalTransfectionReagent)是一種適合于把質(zhì)?；蚱渌问降暮怂?以及核酸蛋白復(fù)合物轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)的真核細(xì)胞中的高效陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試

2、劑。LipoFiterTM優(yōu)點(diǎn)1、轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，操作簡單。2、無明顯細(xì)胞毒性，抗血清干擾等，用LipoFiterTM轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，對于大多數(shù)細(xì)胞，72小時(shí)內(nèi)不更換培養(yǎng)液無明顯細(xì)胞毒性。使用LipoFiterTM轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率，這樣可以減小去除血清對細(xì)胞的損傷。3、LipoFiterTM對于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞都適用，并且可以用于穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選。1LipoFiterTM脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑LipoFiterTM使用說明1.細(xì)胞培養(yǎng)：以六孔板為例，在轉(zhuǎn)染前一天(20-24小時(shí))把約0.4×106細(xì)胞(具體的細(xì)胞

3、數(shù)量據(jù)細(xì)胞大小和細(xì)胞生長速度而定)培養(yǎng)到六孔板內(nèi)，使第二天細(xì)胞匯合度（confluent）能達(dá)到約50%~70%。注1：漢恒生物L(fēng)ipoFiterTM對細(xì)胞毒性極小，因此無需通過增大細(xì)胞匯合度來抵抗轉(zhuǎn)染試劑毒性，我們實(shí)驗(yàn)證明，50%~70%confluent時(shí)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到最優(yōu)。注2：其它培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿參考六孔板進(jìn)行操作，各種培養(yǎng)介質(zhì)如培養(yǎng)板，培養(yǎng)皿的詳細(xì)細(xì)胞接種數(shù)目推薦《各種培養(yǎng)介質(zhì)下LipoFiterTM轉(zhuǎn)染前細(xì)胞接種數(shù)量級詳表》。2.在進(jìn)行下述轉(zhuǎn)染步驟前，把六孔板每孔內(nèi)換成新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液。培養(yǎng)液的體積約為2ml

4、。注：其他培養(yǎng)介質(zhì)培養(yǎng)液體積參見《各種培養(yǎng)介質(zhì)下LipoFiterTM轉(zhuǎn)染DNA詳表》，血清、抗生素、Glutamine等對LipoFiterTM轉(zhuǎn)染并無影響。3.把LipoFiterTM脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻。4.對于待轉(zhuǎn)染的六孔板中一個(gè)孔的細(xì)胞，取一只潔凈無菌離心管，加入4μg質(zhì)粒DNA（其他培養(yǎng)介質(zhì)DNA用量參見附表）及適量DMEM溶液，用槍輕輕吹打混勻,終體積250μl注：其他培養(yǎng)介質(zhì)培養(yǎng)液體積參見《各種培養(yǎng)介質(zhì)下LipoFiterTM轉(zhuǎn)染DNA詳表》，如后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要，可將DMEM用其他如1640、MEM、F12等培養(yǎng)

5、基代替，對LipoFiterTM轉(zhuǎn)染效率及操作并無影響。5.取另一只潔凈無菌離心管，加入238μlDMEM溶液，再加入12μlLipoFiterTM（其他培養(yǎng)介質(zhì)LipoFiterTM用量參見附表），用槍輕輕吹打混勻,終體積250μl，室溫放置5分鐘。2LipoFiterTM脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑6.將步驟4與5中的DNA溶液與LipoFiterTM溶液混合，用槍輕輕吹打混勻。注意：不可Vortex或離心。7.室溫孵育20分鐘。有可能出現(xiàn)絮狀沉淀物，屬正?，F(xiàn)象，不會影響轉(zhuǎn)染效率。8.無論是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞，均把500μlLipoF

6、iterTM-DNA混合物全部加入六孔板的一個(gè)孔內(nèi)。加入時(shí)注意盡量均勻加入到整個(gè)孔內(nèi)，隨后輕輕8字搖擺混勻。注：針對貼壁細(xì)胞，如上述所說，只需將LipoFiterTM-DNA復(fù)合物加入細(xì)胞中孵育6小時(shí)再換液即可。若是轉(zhuǎn)染懸浮或半懸浮細(xì)胞，則推薦通過平角離心轉(zhuǎn)染法，即將適量的LipoFiterTM-DNA復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)皿后（步驟8），封口膜封好，放入平角離心機(jī)，低速（500g-1000g/min）離心1.5h，然后放入培養(yǎng)箱中正常培養(yǎng)6小時(shí)再換液即可。9.細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)6小時(shí)后，去除含有LipoFiterTM-DNA的培養(yǎng)

7、液。每孔加入2ml新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。注：通常LipoFiterTM-DNA混合物和細(xì)胞一起孵育6小時(shí)已經(jīng)足夠產(chǎn)生較高的轉(zhuǎn)染效率。大多數(shù)細(xì)胞和LipoFiterTM-DNA一起培養(yǎng)長達(dá)72小時(shí)未見明顯細(xì)胞毒性。但轉(zhuǎn)染后6小時(shí)更換新鮮培養(yǎng)液對于一些生長非常快速的細(xì)胞有助于提高轉(zhuǎn)染效率。對一些比較易于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞如HEK293T細(xì)胞，換液可視細(xì)胞生長狀況而定，無需為提高轉(zhuǎn)染效率而換液。10.轉(zhuǎn)染后續(xù)處理1)對于基因表達(dá)，再培養(yǎng)24-40小時(shí)后即可檢測轉(zhuǎn)染效果，如轉(zhuǎn)染帶GFP或者其他熒光基因的表達(dá)載體，可用熒光顯微鏡觀測細(xì)胞轉(zhuǎn)染效

8、率。2)用于篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，則在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)即可加入適當(dāng)?shù)暮Y選藥物，例如G418或Puromycin（嘌呤霉素）等，進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)3LipoFiterTM脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑胞株的篩選。注1：對于六孔板中一個(gè)孔的細(xì)胞，DNA用量可以在1.6～4μg的范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)，而Li