剛果紅法測(cè)定麥汁葡聚糖

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1、第16卷無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào)Vol.16第1期JOURNALOFWUXIUNIVERSITYOFLIGHTINDUSTRY1997No.1剛果紅法測(cè)定麥汁和啤酒中的β-葡聚糖李永仙尹象勝顧國(guó)賢陸健(無錫輕工大學(xué)生物工程學(xué)院,無錫,214036)摘要研究了以剛果紅分光光度法測(cè)定麥汁及啤酒中的β-葡聚糖,探討了實(shí)驗(yàn)條34件,在pH8.0的條件下,剛果紅和水溶性的β-葡聚糖(分子量10～10)形成有色34-1-1物質(zhì),摩爾吸光系數(shù)為9.64×(10～10)L·mol·cm,當(dāng)參加反應(yīng)的2.0mlβ-葡聚糖

2、溶液中β-葡聚糖的含量為0～100μg時(shí),反應(yīng)液吸光度的變化符合比耳定律,變異系數(shù)1.1%～5.1%,標(biāo)樣的回收率在90.2%～98.6%之間,測(cè)定麥汁或啤酒中的β-葡聚糖時(shí),變異系數(shù)為3.7%左右。關(guān)鍵詞剛果紅;β-葡聚糖;分光光度法中圖分類號(hào)TS262.50前言β-葡聚糖是大麥胚乳細(xì)胞壁的主要成分,含量因大麥品種、產(chǎn)地、種植年份,自然條件而78異,一般占5.0%～9.5%(大麥的絕干量),細(xì)胞壁中β-葡聚糖大多是分子量為10～10的3高分子化合物,在制麥汁過程中受到麥芽β-葡聚糖酶不同程度水

3、解,其中間產(chǎn)物分子量104～10,為熱水可溶性物質(zhì),能進(jìn)入麥汁,再進(jìn)入啤酒中。含量過高(如>200mg/L)會(huì)造成麥[3]汁或啤酒粘度高,過濾困難,形成啤酒早期混濁。含量過低(<80mg/L)造成啤酒口味淡薄,因此控制麥芽和啤酒中的β-葡聚糖含量是當(dāng)今啤酒界關(guān)心的問題。[4]文獻(xiàn)[8]報(bào)道了β-葡聚糖的測(cè)定方法。傳統(tǒng)的PhenolSulpuric,包括麥汁同硫酸銨在[6]0～4℃下長(zhǎng)達(dá)20h的平衡過程,現(xiàn)該法已逐漸被更新的方法取代。酶法包括酶反應(yīng)的三個(gè)步驟,但測(cè)定的是β-葡聚糖的總含量。近年來,

4、許多研究人員開始采用流動(dòng)注射分析儀的熒[1,5,7]光法測(cè)定β-葡聚糖,然而Fluro-chromeCalcofluor與β-葡聚糖的結(jié)合能力會(huì)受到Cal-[1]cofluor的發(fā)光及實(shí)驗(yàn)條件如pH值、緩沖液的離子強(qiáng)度和試劑濃度的影響。[9]據(jù)報(bào)道,剛果紅與β-葡聚糖的結(jié)合具有高度的專一性。雖然反應(yīng)呈現(xiàn)出隨β-葡聚糖的分子量變化而變化的特征,但對(duì)變化的β-葡聚糖的分子量而言,剛果紅和Calcofluor的敏感[2]性顯示出,兩種試劑與β-葡聚糖的反應(yīng)具有相似的結(jié)構(gòu)模式,而實(shí)驗(yàn)表明,剛果紅法更簡(jiǎn)便

5、、快捷、實(shí)用。1實(shí)驗(yàn)儀器及試劑收稿日期:1994-11-07李永仙等:剛果紅法測(cè)定麥汁和啤酒中的β-葡聚糖91.1儀器721型分光光度計(jì)pHs87-3型酸度計(jì)1.2試劑大麥β-葡聚糖Sigma公司產(chǎn)品;剛果紅(CongoRed)Fluka產(chǎn)品;β-葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱取0.0010g大麥β-葡聚糖,加少量蒸餾水,70℃水浴助溶,冷卻至室溫后定容至10ml,冰箱貯存?zhèn)溆?使用前配制成0.1mg/ml的溶液;剛果紅溶液0.1000克剛果紅溶于0.1mol/LpH8.0的磷酸緩沖液中,定容至1L;酒樣

6、市售12°PLager型啤酒表1標(biāo)準(zhǔn)β-葡聚糖溶液的稀釋試管標(biāo)準(zhǔn)β-葡聚糖溶液稀釋?duì)?葡聚糖溶液蒸餾水組號(hào)(100μg/ml)濃度(μg/2.0ml)2試驗(yàn)方法002.002.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制10.251.7525取6組試管,除0號(hào)為1只外,其余均為20.501.505030.751.25753只平行管,按表1將標(biāo)準(zhǔn)β-葡聚糖溶液進(jìn)41.001.00100行稀釋。以上各試管中,分別加4.0ml剛果51.250.75125紅溶液搖勻,20℃下準(zhǔn)確作用10min,用1.0cm的比色杯,于550nm波長(zhǎng)

7、下測(cè)定吸光度,以0號(hào)管中反應(yīng)液作空白調(diào)零。2.2樣品分析吸取0.1ml麥汁或啤酒,依次加1.9ml蒸餾水,4.0ml剛果紅,20℃下準(zhǔn)確反應(yīng)10min,以2.0ml蒸餾水代替樣品作空白,測(cè)定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得知樣品中的β-葡聚糖含量。3條件確定3.1最大吸收波長(zhǎng)按試驗(yàn)方法測(cè)試試劑及反應(yīng)液的吸收光譜及差譜,最大吸收分別為480nm,500nm,且在550nm處有最大差譜,所以選擇測(cè)定波長(zhǎng)為550nm,吸收光譜和差譜分別見圖1和圖2.圖1吸收曲線圖2差譜水+剛果紅溶液-----β-葡聚糖溶液

8、+剛果紅溶液10無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào)第16卷第1期3.2pH對(duì)測(cè)定的影響1)配制不同酸度的剛果紅溶液:用不同pH值濃度為0.2mol/L的磷酸緩沖液與等體積的濃度為200mg/L蒸餾水的剛果紅溶液混勻備用。2)β-葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0ml,分別加入以上不同酸度的剛果紅溶液4.0ml;2.0ml蒸餾水加入相對(duì)應(yīng)的剛果紅溶液作空白測(cè)定吸光度,結(jié)果見圖3.由圖3可知,pH在7.8～8.4之間,吸光值較大,選擇反應(yīng)時(shí)的pH為8.0.3.3反應(yīng)時(shí)間的選擇圖3吸光度-pH曲線按試驗(yàn)方法,測(cè)定了反應(yīng)液在5～12m