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1、江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)2013年第41卷第6期一41一錢(qián)荷英，高麗，張?jiān)氯A，等．分子標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)家蠶品種抗BmNPV性能[J]．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41(6)：41—43分子標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)家蠶品種抗BmNPV性能錢(qián)荷英，高麗，張?jiān)氯A，孫平江，徐安英(江蘇科技大學(xué)蠶業(yè)研究所，江蘇鎮(zhèn)江212018)摘要：通過(guò)經(jīng)口添飼家蠶核型多角體病毒BmNPV，比較家蠶新品種871C、872C及其雜交種和871、872及其雜交種對(duì)BmNPV抵抗性的強(qiáng)弱，結(jié)果表明，家蠶新品種具有很強(qiáng)的抗BmNPV性能。用分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)不同品種進(jìn)行輔助選擇，抗性品種871C、872C顯示為陽(yáng)性，而易感品種871、872顯示為
2、陰性；并在抗病品種中擴(kuò)增出長(zhǎng)度為999bp的DNA片段，推測(cè)該分子片段與家蠶品種的抗BmNPV性能相關(guān)。關(guān)鍵詞：家蠶；BmNPV；抵抗性；分子標(biāo)記中圖分類號(hào)：$884．51文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002—1302(2013)06—0041～03家蠶核型多角體病毒病，俗稱“血液型膿病”，是由于家BmNPV能力，為培育優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、具長(zhǎng)久穩(wěn)定抗BmNPV能力蠶感染了家蠶核型多角體病毒(Bombyxmorinuclearpolyhe．的實(shí)用新品種奠定基礎(chǔ)。dmsisvirus，BmNPV)而引發(fā)的，是目前生產(chǎn)上主要的家蠶病1材料與方法害，對(duì)蠶繭生產(chǎn)造成了很大危害。自1947年Berg
3、old分離純化出家蠶膿病病毒?以后，各國(guó)科學(xué)家對(duì)該病毒的結(jié)構(gòu)、侵1．1家蠶品種染方式和途徑、遺傳規(guī)律，以及針對(duì)該病毒提出的各種防病、供試的家蠶品種為871、872、871×872、872×、871、871C、抗病措施等進(jìn)行了研究。，并取得了一定進(jìn)展。從育種角872C、871C×872C、872C×871c(帶C為抗BmNPV品種)，均度來(lái)說(shuō)，培育對(duì)病原有強(qiáng)抵抗力的品種將是最有效、也是最環(huán)由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所品種資源室提供。保低碳解決生產(chǎn)問(wèn)題的途徑。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)1．2主要試劑及工具酶的進(jìn)步，各種分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)和利用在抗病育種中得到了很蛋白酶K、PCR回收試劑盒
4、、TaqDNA聚合酶、PCR配套好的利用。。J。緩沖液、4dNT等購(gòu)自TaKaRa公司，JM109感受態(tài)細(xì)胞、Ecoli筆者從保存的家蠶種質(zhì)資源中獲得了一份抗病材料，經(jīng)菌株等為上海生工生物工程公司產(chǎn)品。遺傳分析所發(fā)現(xiàn)的抗病基因?yàn)轱@性主基因遺傳模式。以1．3引物合成春用蠶品種871、872和耐病主基因的載體品種為育種親本，根據(jù)GenBank中已經(jīng)公開(kāi)的與家蠶BmNPV抗性基因連采用基因?qū)?、雜交、回交、純合固定等方法，導(dǎo)入耐病主基因鎖的DNA序列(AY380833．1)，用Pfime~．0軟件設(shè)計(jì)1對(duì)特獲得蠶新品種，該品種于2011年通過(guò)四川省蠶品種審定委員異性弓l物antiNP
5、V—F(5一TcACACAGTCAAAAcccGT一3)會(huì)審定。和antiNPV—R(5一TGTAGAAAATCCTCCCCCT一3)。弓l物從已育成的抗性品種推廣情況看，一般隔若干年后往往由上海生工生物工程有限公司合成。會(huì)因?yàn)榛蚱?、新變異產(chǎn)生u、地理環(huán)境的改變等原因造1．4攻毒方法成品種的抗病能力降低。因此，每隔幾年應(yīng)該對(duì)品種的抗病采用經(jīng)口添毒的方式，將1×10NPV多角體／mL濃度的性做測(cè)試，檢驗(yàn)抗病能力是否下降，以便及時(shí)研究應(yīng)對(duì)措施，病毒逐級(jí)稀釋成1×10、1×10、1×10、1×10多角體／mL，防止因抗病基因的遺失給生產(chǎn)上帶來(lái)消失。另外，用分子標(biāo)共5個(gè)濃度梯度；8
6、71、872及其雜交種(正反交)用1×10～記輔助育種的手段，從分子水平(DNA)上準(zhǔn)確地追蹤抗性基1×10多角~k／mL這4種病毒濃度添毒，871C、872C及其雜因或者與抗性基因連鎖的DNA片段，則可以大大縮短育種年交種用1×10～1×10’多角~k／mL這4種病毒濃度添毒。限，提高檢測(cè)抗病性能的效率。取2齡蠶，分別數(shù)3O頭于二重皿中，然后將不同濃度的病毒通過(guò)經(jīng)口添毒的方法，比較抗病家蠶品種與原系統(tǒng)抗液涂抹于直徑為2cm的桑葉上，每張葉片5O，稍干燥后BmNPV能力，用分子標(biāo)記技術(shù)開(kāi)展抗病基因篩選，并用抗病每個(gè)試驗(yàn)區(qū)給桑葉4張(可在二重皿蓋上平鋪濕紙補(bǔ)濕)?；?與抗病基因
7、連鎖的分子標(biāo)記)檢測(cè)家蠶品種的抗24h后飼喂新鮮桑葉，每天2次，統(tǒng)計(jì)病蠶頭數(shù)，用SPSS16計(jì)算半致死濃度(Lc。)，調(diào)查抗病品種及原系統(tǒng)品種的抗病性。收稿日期：2012—11—091．5基因組DNA的提取基金項(xiàng)目：江蘇省鎮(zhèn)江市科技支撐計(jì)劃(農(nóng)業(yè))(編號(hào)：NY2010026)。參照夏慶友等的方法，取試驗(yàn)品種的家蠶蛾子頭部放作者簡(jiǎn)介：錢(qián)荷英(1971一)，女，江蘇溧陽(yáng)人，碩士，副研究員，主要從入加有家蠶基因組DNA抽提緩沖液(10mmol／LTris—HC1，事家蠶遺傳育種研究。Tel：(05
