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《密碼子優(yōu)化型鴨甲肝病毒VP1基因在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中國動物傳染病學(xué)報2014，22(1)：1-8ChineseJouma1ofAnimalInfectiousDiseases·研究論文·密碼子優(yōu)化型鴨甲肝病毒VP1基因在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)李傳峰，陳宗艷，孟春春，梁瑞英，胡文，劉光清(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海200241)摘要：為了提高基因A型鴨甲肝病毒(DuckhepatitisAvirus，DHAV)VP1基因在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)水平，本研究根據(jù)昆蟲細(xì)胞密碼子偏愛性對野生型DHAVVP1(wtVP1)基因進行改造，合成了optiVP1基因，并利用Bac．to．Bac表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建了重組
2、桿狀病毒rBacmid—wtVP1和rBacmid．optiVP1分別轉(zhuǎn)染對數(shù)生長期的sf9昆蟲細(xì)胞表達(dá)VP1蛋白。轉(zhuǎn)染72h后，sf9細(xì)胞出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變(cytopathiceffect，CPE)，Western—blot和間接免疫熒光法(indirectimmunofluorescenceassay，IFA)檢測結(jié)果表明VP1蛋白在重組桿狀病毒感染的sf9昆蟲細(xì)胞中獲得了良好表達(dá)。用ImageJ軟件對Western．blot掃描的圖片進行灰度分析發(fā)現(xiàn)，optiVP1基因在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于wtVP1。本研究為進一步研制診斷抗
3、原和新型基因工程疫苗的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：鴨甲肝病毒；VP1；重組桿狀病毒；密碼子優(yōu)化中圖分類號：$852．659．6文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號：1674—6422(2014)01．0001．08ENHANCEDEXPRESSIONOFCODON．OPTIMIZEDVPlGENEoFDUCKHEILTITISAVIRUSININSECTCELLSLIChuan—feng，CHENZong—yan，MENGChun—chun，LIANGRui—ying，HUWen，LIUGuang-qing(ShanghaiVeterinaryResearch
4、Institute,CAAS,Shanghai200241，China)Abstract：TheobjectiveofthepresentstudywastoenhanceexpressionlevelofVP1geneofDuckhepatitisAvirus(DHAV)genotypeAininsectcellsbymanipulatingthecodonusagebias．Thecodonusageofwild—typeDHAVVP1(wtVP1)genewasoptimizedanddesignatedasoptiVP1．Therec
5、ombinantrBacmid—optiVP1andrBacmid—wtVP1plasmidswerethenconstructedusingtheBac—to—Bacbaculovirusexpressionsystem(BEVS)andthentransfectedtosf9insectcellsatlogarithmicphaseforexpressionofVP1protein．Thetypicalcytopathiceffectwasobservedinsf9cellsat72hposttransfection．Theexpress
6、ionofVP1proteininsf9cellswasconfirmedinWesternblottingandindirectimmunofluorescenceassay(IFA)．TheVP1amountsonWesternblottingweremeasuredusingthesoftwareImageJ．TheexpressionlevelofoptiVP1genewassignificantlyincreasedascomparedwithwtVP1gene．Thisstudyprovidedabasisfordevelopme
7、ntofdiagnosticreagentsandgeneticallyengineerednovelvaccinesforDHAV．Keywords：DuckhepatitisAvirus；VP1；recombinantbaculovirus；codonoptimization收稿日期：2013-10-30基金項目：國家自然科學(xué)基金項目(31101848)；中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項(2012JB13)；公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(2(11()03012)；國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863)項目(2011AA10A200)作者簡介
8、：李傳峰，男，博士，助理研究員，主要從事水禽病毒病分子生物學(xué)研究通信作者：劉光清，E—mail：liugq@shvri．a(chǎn)c．cn中國動物傳染病學(xué)報2014年2月根
