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《β-酪蛋白淀粉樣纖維沉淀的形成及影響因素-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、V0l_35高等學?；瘜W學報No．52014年5月CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES976—980-酪蛋白淀粉樣纖維沉淀的形成及影響因素劉繼華，JohnA．Carver2，DavidC．Thorn(1．吉林大學藥學院，長春130021；2．阿德萊德大學物理化學學院，阿德萊德5005)摘要利用硫磺素T(ThT)熒光分析法和透射電子顯微鏡檢測-酪蛋白形成淀粉樣纖維沉淀(Fibril)的動力學過程，研究了磷脂和硫酸肝素對其Fibril形成的影響．實驗結(jié)果表明，JB一酪蛋白在65℃下，pH值為5．4～9．0
2、的范圍內(nèi)，加熱252h以上，并未形成Fibril，說明口一酪蛋白是一種很好的分子伴侶，在高溫、弱酸和弱堿條件下均不形成淀粉樣纖維沉淀．甘油磷酸膽堿D6PC和D9PC可以顯著地促進一酪蛋白的Fibril的形成，說明一定條件下蛋白質(zhì)可能與細胞膜之間存在相互作用而導(dǎo)致其二級構(gòu)象的轉(zhuǎn)變．硫酸肝素對-酪蛋白形成Fibril具有促進作用，在炎癥組織中，硫酸肝素表達量的增加有可能促進一酪蛋白形成Fibril，說明乳腺炎與乳腺中的CorporaAmylacea的形成存在一定的聯(lián)系．關(guān)鍵詞一酪蛋白；蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀；磷脂；硫酸肝素；ThT熒光分析法中
3、圖分類號0629．73文獻標志碼A盧一酪蛋白是乳汁的重要組成蛋白之一，在牛乳中濃度為8．40—8．61mg／mL，占牛乳蛋白總量的37％lj，是牛乳中的重要營養(yǎng)成分，對人類鈣等金屬元素的吸收有重要的影響J．近年研究發(fā)現(xiàn)，／3．酪蛋白具有免疫增強作用j，與I型糖尿病相關(guān)J，對乳腺癌和結(jié)腸癌也有一定的影響J，具有多種生理功能．人類的乳汁蛋白組成與牛乳不同，主要由盧．酪蛋白和，c一酪蛋白組成J，其中．酪蛋白具有分子伴侶的活性，而，(一酪蛋白容易形成淀粉樣纖維沉淀(Fibril)J，二者呈現(xiàn)相反的特性，使得正常狀態(tài)下人乳呈現(xiàn)良好的溶解狀態(tài)．蛋白
4、質(zhì)的Fibril是由蛋白質(zhì)的錯誤折疊引起的，癌癥、帕金森氏癥、老年癡呆癥和Ⅱ型糖尿病等都與蛋白質(zhì)發(fā)生錯誤折疊，形成Fibril有關(guān)J．在動物的乳腺中還發(fā)現(xiàn)了類似蛋白質(zhì)Fibril的小體與鈣石結(jié)合在一起，被稱為CorporaAmylacea(CA)，它沉積在乳腺的間隙中，阻礙了乳汁的分泌和流動，從而引起乳腺疾病12]．Sauter等研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者的乳腺抽取液中含有與一酪蛋白33～62肽段結(jié)構(gòu)相似的多肽，與乳腺癌的發(fā)生相關(guān)，可作為乳腺癌的臨床診斷標志，表明盧一酪蛋白與乳腺癌的形成相關(guān)；然而，根據(jù)Thorn等的研究，一酪蛋白具有分子伴侶
5、的活性，可以抑制O／一酪蛋白形成Fibril，應(yīng)該具有一定的抗腫瘤活性，二者結(jié)論相矛盾．前文¨研究發(fā)現(xiàn)，雖然．酪蛋白具有抑制Fibril形成的作用，但本身在一定條件下可以形成Fibril．磷脂是生物膜的重要組成部分；體內(nèi)有炎癥反應(yīng)時，細胞中硫酸肝素的量會增加，二者均與蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的形成有關(guān)¨．為探究一酪蛋白是否也可在一定條件下發(fā)生錯誤折疊，從而失去了對Fibril的抑制作用，本文探討了盧一酪蛋白形成Fibril的條件以及磷脂和硫酸肝素的影響．通過研究二者對盧-酪蛋白形成Fibril的影響，考察生物膜中的磷脂和細胞中的硫酸肝素能否
6、促進．酪蛋白Fibril的形成，從而與導(dǎo)致乳腺疾病的CorporaAmylacea的形成存在關(guān)聯(lián)．1實驗部分1．1試劑與儀器一酪蛋白(盧一Casein)、硫磺素T(ThT)、磷脂(1，2-Dipropionyl—s—glycero-3-phosphocholine，D3PC；1，2-Dihexanoyl—sir／,一glycero一3一phosphocholine，D6PC；1，2-Dinonanoyl—srt-glycero一3一phosphocholin，D9PC)和收稿日期：2013-09-09．基金項目：吉林省自然科學基金(批準
7、號：20130101116JC)資助．聯(lián)系人簡介：劉繼華，女，博士，副教授，主要從事天然產(chǎn)物化學及生物活性研究．E—mail：jljh@sina．corn劉繼華等：一酪蛋白淀粉樣纖維沉淀的形成及影響因素硫酸肝素(HeparinSulphate，HS)的純度均大于98％，購自美國Sigma公司；其余試劑均為分析純．CaryEclipse熒光光譜儀(美國Varian公司)；CM100透射電子顯微鏡(美國Philips公司)．1．2實驗過程1．2．1一酪蛋白樣品溶液的制備為了考察不同的溫度、pH值和加熱時間下，一酪蛋白能否形成Fibril，以
8、pH值分別為5．4，5．8，6．0，6．5，7．0，8．0，8．5和9．0的磷酸鈉緩沖液(50mmol／L)溶解-酪蛋白，制成濃度為3mg／mL的溶液，分別在37，5O和65℃下加熱，并于加熱后0，24，4
