沉默人肺癌A549細(xì)胞中期因子基因表達(dá)對細(xì)胞凋亡的影響.pdf

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1、6O8重慶醫(yī)學(xué)2015年2月第44卷第5期論著·基礎(chǔ)研究doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2015．05．010沉默人肺癌A549細(xì)胞中期因子基因表達(dá)對細(xì)胞凋亡的影響孫常銘，王麗萍，劉敏，趙維川，樸宗方，張秀琴△(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科，河北承德067000)摘要：目的研究RNA干擾(RNAi)人肺癌A549細(xì)胞中期因子(MK)基因表達(dá)及對腫瘤細(xì)胞凋亡的影響。方法構(gòu)建舍MKsiRNA真核表達(dá)載體，將其轉(zhuǎn)染到人肺癌A549細(xì)胞株中(實驗組)，另有陰性對照組(轉(zhuǎn)染陰性對照質(zhì)粒)和空白對照組。應(yīng)用RT—PCR的方法檢測各組細(xì)胞

2、中MKmRNA的表達(dá)情況；采用Westernblot法檢測MK蛋白的表達(dá)情況；用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果實驗組MK蛋白和mRNA表達(dá)都下降，分別下降了89．3和83．3。轉(zhuǎn)染實驗組A549細(xì)胞有自發(fā)性凋亡的發(fā)生，早期凋亡比陰性對照組和空白組分別提高了15．5倍和9．34倍。實驗組caspase一3活性明顯高于陰性對照組和空白對照組(Pd0．05)。結(jié)論RNAi下調(diào)人肺癌A549細(xì)胞株MK的表達(dá)，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的自身凋亡。關(guān)鍵詞：RNA干擾；細(xì)胞凋亡；A549；中期因子中圖分類號：R734．2文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：l671—8348(

3、2015)05—0608—02EffectsofsilencinglungcancerA549midkinegeneexpressiononcellapoptosisSunChangming，WangLiping，LiuMin，ZhaoWeichuan，PiaoZongfang，ZhangXiuqin(DepartmentofClinicalLaboratory，theAJ廠iliatedHospitalofChengdeMedicalCollege，Chengde，Hebei067000，China)Abstract：ObjectiveTost

4、udytheeffectsofmidkine(MK)byRNAiongeneexpressionandapoptosisinA549cel1．MethodsConstructMKsiRNAexpressionvector，andthenwastransfectedthatintoA549cells(positivegroup，negativegroup。blankcellgroup)．ExpressionofMKwasdeterminedbyRT—PCRandWesternblotineachgroup；apoptosiswasevaluated

5、byflowcytometry．ResultsTheexpressionofMKproteindeclined89．3andexpressionofmRNAdeclinded83．3inpositivegroup(positivegroup)．Spontaneousapoptosiswasdetetedinpositivegroup，earlyapoptosisincreasedby15．5timesand9．34timesthanthenega—tivecontrolgroupandblankgroup．Activitiesofcaspase一

6、3washigherthanothertwogroups(P％0．05)．ConclusionRNAicanin—hibitexpressionofMKandinduceapoptosisofA549cells．Keywords：RNAinterference；apoptosis；A549；midkine中期因子(MK)就是與腫瘤發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系的基性抑制劑DEVD-CHO試劑盒(瑞士Bachem公司)。因。MK能調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、存活和分化，并參與腫瘤發(fā)病過1．2方法程]。在許多不同類型的腫瘤中表達(dá)增強(qiáng)，包括食管癌、胃1．2．1MKs

7、RNA干

8、擾質(zhì)粒的構(gòu)建(1)siRNA的設(shè)計：根癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、膽囊癌、肺癌、甲狀腺癌、乳腺癌、膀胱據(jù)GeneBankMK基因序列(NM001O12333)，結(jié)合MKtuRNA癌、子宮癌、卵巢癌、前列腺癌和肝癌、神經(jīng)細(xì)胞瘤、惡性膠質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)，設(shè)計了一條特異性的針對MK基因389～407bp瘤、髓系白血病]，陽性表達(dá)率45～9O，MK在正常組織的19nt的siRNA，序歹U為5f_GTACAAGTTTGAGAACTG中不表達(dá)或低表達(dá)_6]。所以，血清MK水平有望成為一個新G一3。BLAST分析排除其同源序列。(2)合成編碼siRNA的的腫瘤標(biāo)志物l_

9、7]。MK可以促進(jìn)腫瘤血管的生成，增強(qiáng)腫瘤的DNA序列：結(jié)構(gòu)CACC4-Sense4-Loop4-Antisense4-終止信耐藥性，抑