豬弓形蟲病的診療報告.doc

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1、豬弓形蟲病的診療報告　　摘要：對一例病豬進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查和實驗室檢查，結(jié)合血清學(xué)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法進(jìn)行病例檢測，結(jié)果表明，該例病豬是由弓形蟲感染引起?！　￡P(guān)鍵詞：豬；弓形蟲?。痪酆厦告?zhǔn)椒磻?yīng)；診斷　　中圖分類號：Ｓ８５８．２８；Ｓ８５１．３１＋３；Ｓ８５２．７２文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８11404－0796-04　　　　ClinicReportforDiagnosesofSwineToxoplasmosis　　　　ＬＩＵＴａｏ，ＷＡＮＧＲｕｉ，ＱＵＺｈｅ－ｈｕｉ，ＷＥＩＡｉ－ｚｈｉ，ＺＨＡＮＧＬｉｎｇ　　　

2、　　?。粒猓螅簦颍幔悖簦海粒睿澹穑椋洌澹恚椋铮欤铮纾椋悖幔欤椋睿觯澹螅簦椋纾幔簦椋铮睿幔睿洌欤幔猓铮颍幔簦铮颍簦澹螅簦螅鳎澹颍澹悖幔颍颍椋澹洌铮酰簦铮睿铮睿澹悖幔螅澹铮妫穑椋纾洌椋螅澹幔螅澹茫铮恚猓椋睿澹洌鳎椋簦瑁螅澹颍铮欤铮纾幔睿洌校茫遥洌澹簦澹悖簦椋铮睿簦瑁澹颍澹螅酰欤簦螅螅瑁铮鳎澹洌簦瑁幔簦簦瑁澹洌椋螅澹幔螅鍂asｃａｕｓｅｄｂｙＳｗｉｎｅＴｏｘｏｐｌａｓｍｏｓｉｓ．　?。耍澹鳎铮颍洌螅海螅鳎椋睿澹籺ｏｘｏｐｌａｓｍosis；ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ；ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　　　　弓形體

3、又叫弓形蟲、弓漿蟲或毒漿蟲，屬于一種單細(xì)胞原蟲，是引發(fā)弓形蟲病的病原體。病原體寄生在終末宿主貓科動物體內(nèi)生長繁殖，形成卵囊并隨宿主糞便排出體外，發(fā)育成熟而具有感染力。具有感染力的卵囊污染食物和水源，被中間宿主食入或飲入后，經(jīng)淋巴和血液進(jìn)入組織器官，并侵入有核細(xì)胞內(nèi)，造成組織器官的嚴(yán)重?fù)p害和機體免疫力下降，而出現(xiàn)患病體征。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計資料表明，一般豬場豬群感染率在２０％以上，有的高達(dá)６０％，死亡率達(dá)６０％～８０％。弓形蟲病一年四季均可發(fā)生，但以每年的４～１０月多發(fā)，任何年齡的豬都可感染，而以１０～５０ｋｇ的中小豬發(fā)病較嚴(yán)重。

4、臨床上生產(chǎn)母豬常有發(fā)病，但配種公豬很少發(fā)生，這可能與抵抗力有關(guān)［1-3］。高床飼養(yǎng)的豬群少見發(fā)病，而平養(yǎng)的豬群則屢見不鮮，可能與豬只接觸糞便的程度有關(guān)。河南省信陽市平橋區(qū)某商品豬場養(yǎng)豬３０００多頭，２０１０年４～５月期間豬群突然發(fā)病，在１個月內(nèi)陸續(xù)死亡５頭，２０多頭病危，另有１００多頭發(fā)病。發(fā)病和死亡的豬以４０～５０ｋｇ的中小豬為主。作者主要就這起豬弓形蟲病的流行特點、臨床癥狀、診斷方法以及防治處理等方面做如下報告?！　。辈牧吓c方法　　１．１材料　?。保保痹囼瀯游铮鳖^發(fā)病死亡的育肥豬；６頭活豬，有育肥豬４頭、母豬１頭

5、和空懷母豬１頭，從６頭活豬頸靜脈隨機無菌采集全血，每頭約４ｍＬ，得到血液樣品?！　。保保矙z測試劑Ｔａｑ酶、ＰＣＲ緩沖液、ｄＮＴＰ為大連寶生物公司產(chǎn)品；蛋白酶Ｋ為Ｍｅｒｃｋ公司產(chǎn)品；弓形蟲抗原ＥＬＩＳＡ檢測試劑盒購自武漢科前生物技術(shù)有限公司；小白鼠購自信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院。染色液有瑞氏染液、ＨＥ染液?！　。保保骋镌O(shè)計根據(jù)ＧｅｎＢａｎｋ中已登錄的豬弓形體基因序列，利用Ｐｒｉｍｅｒ５．０軟件設(shè)計一對引物，上游引物Ｐ１為５′－ＣＧＴＧＡＣＴＣＧＧＧＣＣＣＡＧＣＴＧＣＧＴＣＴＧ－３′；下游引物Ｐ２為５′－ＣＧＣＴＧＣＡＧＡＣ

6、ＡＣＡＧＴＧＣＡＴＣＴＧＧＡＴ－３′。預(yù)計ＰＣＲ擴增產(chǎn)物長度為４６３ｂｐ?！　。保保粗饕獌x器為實驗室現(xiàn)有的ＰＣＲ儀、高速冷凍離心機、尼康Ｅ２００顯微鏡、尼康４５００數(shù)碼照相機?！　。保搏F醫(yī)檢查　?。保玻蓖科瑢Πl(fā)病死亡的育肥豬進(jìn)行剖檢，剖檢時，取病死豬的血液、心包液和腹腔液進(jìn)行涂片，用瑞氏染色法染色后光學(xué)顯微鏡檢查，進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查?！　。保玻膊±韺W(xué)檢查按常規(guī)方法對發(fā)病死亡的育肥豬進(jìn)行尸體剖檢，記錄眼觀病變情況?！　。保玻逞鍖W(xué)檢測將采集到的４頭育肥豬的全血在高速冷凍離心機上５０００ｒ／ｍｉｎ離心８ｍｉｎ

7、，分離血清。采用豬弓形蟲酶聯(lián)免疫吸附試驗進(jìn)行檢測。　?。保常校茫覚z測　　剖解時無菌分別取一塊肺臟、肝臟、淋巴結(jié)以及脾臟組織，放入無菌塑料袋中，于－７０℃環(huán)境備用?！　。保常保模危恋奶崛∪〔×戏巍⒏?、淋巴結(jié)組織研碎，后加１０倍生理鹽水接種小白鼠腹腔，每只接種０．５ｍＬ。待小白鼠出現(xiàn)被毛粗亂、呼吸促迫癥狀，從其腹水收取弓形蟲速殖子，計數(shù)后加入ＳＤＳ裂解液和蛋白酶Ｋ，混勻后置于３７℃消化過夜。消化好的蟲體懸浮液再加入５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ溶液和５％ＣＴＡＢ溶液，６５℃水?。保埃恚椋?；苯酚∶氯仿∶異戊醇溶液抽提２次，用異丙醇

8、沉淀，７０％乙醇洗滌；適量的滅菌水溶解，－２０℃保存?！　。保常玻校茫曳磻?yīng)ＰＣＲ反應(yīng)體系為５０μＬ，ＤＮＡ模板添加量為０．５μｇ。ＰＣＲ反應(yīng)程序為９４℃預(yù)變性５ｍｉｎ；９４℃變性３０ｓ，５３℃退火３０ｓ，７２℃延伸３０ｓ，３５個循環(huán)；最后７２℃延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)１２ｇ／Ｌ瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果［4-7］