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《用RAPD標記研究苧麻屬植物的親緣關系.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在應用文檔-天天文庫。
1、用RAPD標記研究苧麻屬植物的親緣關系 摘要：采用改良ＣＴＡＢ法提取了１３份苧麻屬材料的基因組ＤＮＡ，利用ＲＡＰＤ進行親緣關系分析。從１２０條隨機引物中篩選出了２３條引物，對１３份材料共擴增出２３５個條帶。根據(jù)擴增結(jié)果進行聚類分析，得到反映各材料間親緣關系的樹狀圖。ＲＡＰＤ的分析結(jié)果與傳統(tǒng)分類學的分類結(jié)果基本相符?！ ￡P鍵詞：苧麻；親緣關系；ＲＡＰＤ 中圖分類號：Ｓ５６３．１；Ｑ７８文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８11407－1499-03 GeneticRelationshipamongB
2、oehmeriaspp.RevealedbyRAPD ?。眩桑眨茫幔椋螅瑁澹睿纾茫龋牛危牵茫瑁幔铮瑁酰?，ＺＨＡＯＬｉ－ｎｉｎｇ，ＬＩＹｕ－ｊｕｎ，ＺＡＮＧＧｏｎｇ－ｇｕ Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｌｅａｖｅｓｏｆＢｏｅｈｍｅｒｉａｓｐｐ．ｂｙｉｍｐｒｏｖｅｄＣＴＡＢｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｏｆ１３Ｂｏｅｈｍｅｒｉａｓｐｐ．ｂｙｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ．
3、２３５ｂａｎｄｓｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙ２３ｐｒｉｍｅｒｓｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ１２０ａｒｂｉｔｒａｒｙｐｒｉｍｅｒｓ．Ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅｗｅｒｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄ；ａｎｄｄｅｎｄｒｏｇｒａｍｓｈｏｗｉｎｇｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔｈｒｏｕｇｈａｎｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄｐａｉｒ－ｇｒｏｕｐｍｅｔｈｏｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅａｍｐｌｉｆｙｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓ．Ｔｈｉｓｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｗａｓｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｃｌ
4、ａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ. ?。耍澹鳎铮颍洌螅海拢铮澹瑁恚澹颍椋醩pp.；ｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ；ＲＡＰＤ 我國是苧麻的發(fā)源地，擁有最豐富的苧麻種質(zhì)資源。國內(nèi)的科技人員在苧麻資源的搜集、整理、評價方面做了大量工作?！ ≡谥参锓诸悓W方面，王文采［１］通過形態(tài)學分析對我國苧麻屬的３２種１１變種進行了比較全面的描述；臧鞏固［２］通過核型分析討論了苧麻屬五組間的進化關系。但是形態(tài)學分析和核型分析都有一定的局限性，隨著分子生物學的飛速發(fā)展，利用分子標記技術對植物進行更加準確客觀地分類鑒定和
5、親緣關系分析成為可能?！ ”狙芯恳栽耘喾N苧麻“圓葉青”和其他１２份野生苧麻為試驗材料，利用ＲＡＰＤ技術分析它們之間的親緣關系，同時結(jié)合傳統(tǒng)分類學分類方法驗證其分析結(jié)果的可靠性，為分子標記技術在苧麻屬植物的鑒定分類及種間親緣關系上的分析應用提供了依據(jù)?！ 。辈牧吓c方法 ?。保辈牧稀 。保撤萜r麻材料見表１，均取自國家種質(zhì)長沙苧麻圃。 ?。保卜椒ā 。保玻被蚪MＤＮＡ的提取與檢測ＤＮＡ提取采用改良ＣＴＡＢ法［３，４］并加以改進。?。保撤萜r麻屬材料的幼嫩葉片提取基因組ＤＮＡ。稀釋一定倍數(shù)后，應用紫外－可見
6、分光光度計檢測其在２６０ｎｍ和２８０ｎｍ的吸光值，以測定ＤＮＡ濃度、評估其純度?！ 。保玻玻遥粒校姆磻w系的優(yōu)化參照鐘軍［５］、任春曉［６］的方法并對影響ＰＣＲ反應的各影響因子逐一進行梯度優(yōu)化，包括模板ＤＮＡ用量、Ｍｇ２＋濃度、Ｔａｑ酶用量、ｄＮＴＰｓ濃度、退火溫度、引物濃度、ＰＣＲ條件等，建立起適合本實驗的ＲＡＰＤ反應體系?！ 。保玻常遥粒校臄U增、電泳以提取的１３種基因組ＤＮＡ為模板，根據(jù)優(yōu)化后的ＲＡＰＤ反應體系，用１２０條ＲＡＰＤ引物分別進行ＰＣＲ擴增。ＰＣＲ產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，凝膠濃度２
7、％。ＥＢ染色后使用凝膠成像系統(tǒng)照相，觀察記錄?！ 。保玻磾?shù)據(jù)統(tǒng)計及遺傳多樣性分析選擇清晰且多態(tài)性較高的擴增條帶進行統(tǒng)計，相同位置有條帶的記為“１”，無條帶的記為“０”，失敗或缺失的記為“９”?；跀U增產(chǎn)物數(shù)據(jù)庫，應用ＮＴＳＹＳｐｃ－２．１０ｅ軟件計算相似系數(shù)，以獲得１３份材料的遺傳相似系數(shù)矩陣，進而采用ＵＰＧＭＡ法進行聚類分析，以獲得遺傳樹狀圖譜并進行分析?！ 。步Y(jié)果與分析 ２．１基因組ＤＮＡ提取結(jié)果 野生苧麻的含糖量很高，從其中提取高質(zhì)量的基因組ＤＮＡ具有一定困難。通過改良的ＣＴＡＢ法從野生苧麻
8、葉片中提取的基因組ＤＮＡ，經(jīng)紫外分光光度計測定，ＤＮＡＯＤ２６０／ＯＤ２８０比值為１．８～２．０，０．８％的瓊脂糖凝膠電泳顯示，所提取的基因組ＤＮＡ顯示為一條相對清晰完整的帶，大小在１９ｋｂ左右，無明顯降解痕跡，也沒有可見的ＲＮＡ。說明本實驗所提取的苧麻基因組ＤＮＡ純度較高、質(zhì)量好，符合ＲＡＰＤ實驗要求?！ 。玻搀w系優(yōu)化結(jié)果 通過對各成分進行梯度實驗對比得到了較好的ＲＡＰＤ擴增體系和擴增條件，優(yōu)化后各成分最佳用量如表２，擴
