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《抗人HPPCn單克隆抗體的制備及鑒定.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、774ISSN1007—8738細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志(ChinJCellMolImmuno1)2010，26(8·論著·文章編號(hào)：1007—8738(2010)08—0774—04抗人HPPCn單克隆抗體的制備及鑒定霍景瑞，姚西寧，劉英富，劉保才，吳峰，范國(guó)才，王清明(蛋白質(zhì)組學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京蛋白質(zhì)組研究中心，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所，北京102206)Productionandidentificationofamen-限稀釋法進(jìn)行亞克隆，獲得穩(wěn)定分泌抗人HPPCnmAb的細(xì)胞株。采用問(wèn)接ELISA、Wester
2、nblot、Ig亞類快速定性試紙分oclonalantibodyagainsthumanHPPCn析法等鑒定抗體的生物學(xué)特性；通過(guò)細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察了HPPCn蛋白的細(xì)胞定位。通過(guò)噬菌體肽庫(kù)技術(shù)分析抗體HUOJing—rui，YAOXi—ning，LIU，LIUBao-所識(shí)別的抗原表位。結(jié)果：得到了1株穩(wěn)定分泌抗人HPPCnc，F(xiàn)eng，F(xiàn)ANGuo—cai，WANGQing—ming抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為W2一D5。經(jīng)Ig亞類分析確定，StateKeyLaboratoryofProteomics，InstituteofR
3、adiationMedi—該細(xì)胞株分泌的抗體屬于IgG1亞類。間接ELISA檢測(cè)表明，cine，AcademyofMilitaryMedicalScience，Bering102206，China該抗體檢測(cè)HPPCn的極限為0．1g／L；Westernblot結(jié)果顯示，該抗體能特異性識(shí)別HPPCn。細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)，證實(shí)[Abstract]AIM：Tomakemonoclonalantibody(mAb)了HPPCn蛋白定位在細(xì)胞核。通過(guò)肽庫(kù)篩選及表位分析認(rèn)againsthumanHPPCnfortheuseinresearch
4、onHPPCn’S為，該抗體識(shí)別的表位可能為HPPCn(IHLELRN)。結(jié)論：functionanditsrelationshipwithliverdiseases．METHODS：成功地獲得了抗人HPPCn的特異性mAb。ThefemaleBALB／cmicewerejmmunizedwiththerecombi—[關(guān)鍵詞]HPPCn；單克隆抗體；效價(jià)；噬菌體肽庫(kù)nantHPPCnproteins．Splenoc~esandSp2／0cellswere[中圖分類號(hào)]R392．11[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]BfusedwithPEG．15
5、00．ThepositiveclonewasidentifiedthroughindirectELISAandthensubclonedbylimiteddilu-LANP(1eucine．richacidicnuclearprotein)蛋白家tion．IndirectELlSA．WesternblotandIgsub-classidentifi—族是一類富含亮氨酸重復(fù)序列、進(jìn)化上高度保守的cationkitwereusedtoidentifythemAbsproperties．Byim-mun0fIuOrescenceexp
6、eriments．westudiedthecelularIO—蛋白，廣泛存在于各個(gè)物種之問(wèn)。它們參與了包括calizationofHPPCn．ThemAbepitopewasalsoanalyzed轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、激素受體相互作用、細(xì)胞usingpeptidephagedisplaytechnology．RESULTS：Anan。凋亡等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。在對(duì)核糖核酸酶抑制劑ti-HPPCnmAb，namedW2-D5，wasobtained．Itbelongsto(PI)的晶體結(jié)構(gòu)分析研究中，Kobe等?第1次描述IgGl
7、subclass．ItcouldspeciallybindtohumanHPPCn．了LANP家族的富亮氨酸重復(fù)序列(Leucine．richre．Furthermore，byimmunofluorescenceresults，weconfirmedpeat，LRR)的．片層一loop一螺旋馬蹄狀結(jié)構(gòu)，并且指出HPPCnIocatedinthenucleusandourmAbcouldcombined了該結(jié)構(gòu)域是發(fā)生蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)構(gòu)withthenaturalprotein．WiththemAb．them_nimaI
8、detecta-基序。大量研究結(jié)果表明，LANP家族蛋白與多種腫bleconcentrationwas0。1．g／LforHPPCn；Thepeptidese-瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。。quenceofHPPCn7_j3(IHLELRN)wasidentified
