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《抗人HPPCn單克隆抗體的制備及鑒定.pdf》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、774ISSN1007—8738細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志(ChinJCellMolImmuno1)2010,26(8·論著·文章編號(hào):1007—8738(2010)08—0774—04抗人HPPCn單克隆抗體的制備及鑒定霍景瑞,姚西寧,劉英富,劉保才,吳峰,范國(guó)才,王清明(蛋白質(zhì)組學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京蛋白質(zhì)組研究中心,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所,北京102206)Productionandidentificationofamen-限稀釋法進(jìn)行亞克隆,獲得穩(wěn)定分泌抗人HPPCnmAb的細(xì)胞株。采用問(wèn)接ELISA、Wester
2、nblot、Ig亞類快速定性試紙分oclonalantibodyagainsthumanHPPCn析法等鑒定抗體的生物學(xué)特性;通過(guò)細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察了HPPCn蛋白的細(xì)胞定位。通過(guò)噬菌體肽庫(kù)技術(shù)分析抗體HUOJing—rui,YAOXi—ning,LIU,LIUBao-所識(shí)別的抗原表位。結(jié)果:得到了1株穩(wěn)定分泌抗人HPPCnc,F(xiàn)eng,F(xiàn)ANGuo—cai,WANGQing—ming抗體的雜交瘤細(xì)胞株,命名為W2一D5。經(jīng)Ig亞類分析確定,StateKeyLaboratoryofProteomics,InstituteofR
3、adiationMedi—該細(xì)胞株分泌的抗體屬于IgG1亞類。間接ELISA檢測(cè)表明,cine,AcademyofMilitaryMedicalScience,Bering102206,China該抗體檢測(cè)HPPCn的極限為0.1g/L;Westernblot結(jié)果顯示,該抗體能特異性識(shí)別HPPCn。細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn),證實(shí)[Abstract]AIM:Tomakemonoclonalantibody(mAb)了HPPCn蛋白定位在細(xì)胞核。通過(guò)肽庫(kù)篩選及表位分析認(rèn)againsthumanHPPCnfortheuseinresearch
4、onHPPCn’S為,該抗體識(shí)別的表位可能為HPPCn(IHLELRN)。結(jié)論:functionanditsrelationshipwithliverdiseases.METHODS:成功地獲得了抗人HPPCn的特異性mAb。ThefemaleBALB/cmicewerejmmunizedwiththerecombi—[關(guān)鍵詞]HPPCn;單克隆抗體;效價(jià);噬菌體肽庫(kù)nantHPPCnproteins.Splenoc~esandSp2/0cellswere[中圖分類號(hào)]R392.11[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]BfusedwithPEG.15
5、00.ThepositiveclonewasidentifiedthroughindirectELISAandthensubclonedbylimiteddilu-LANP(1eucine.richacidicnuclearprotein)蛋白家tion.IndirectELlSA.WesternblotandIgsub-classidentifi—族是一類富含亮氨酸重復(fù)序列、進(jìn)化上高度保守的cationkitwereusedtoidentifythemAbsproperties.Byim-mun0fIuOrescenceexp
6、eriments.westudiedthecelularIO—蛋白,廣泛存在于各個(gè)物種之問(wèn)。它們參與了包括calizationofHPPCn.ThemAbepitopewasalsoanalyzed轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、激素受體相互作用、細(xì)胞usingpeptidephagedisplaytechnology.RESULTS:Anan。凋亡等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。在對(duì)核糖核酸酶抑制劑ti-HPPCnmAb,namedW2-D5,wasobtained.Itbelongsto(PI)的晶體結(jié)構(gòu)分析研究中,Kobe等?第1次描述IgGl
7、subclass.ItcouldspeciallybindtohumanHPPCn.了LANP家族的富亮氨酸重復(fù)序列(Leucine.richre.Furthermore,byimmunofluorescenceresults,weconfirmedpeat,LRR)的.片層一loop一螺旋馬蹄狀結(jié)構(gòu),并且指出HPPCnIocatedinthenucleusandourmAbcouldcombined了該結(jié)構(gòu)域是發(fā)生蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)構(gòu)withthenaturalprotein.WiththemAb.them_nimaI
8、detecta-基序。大量研究結(jié)果表明,LANP家族蛋白與多種腫bleconcentrationwas0。1.g/LforHPPCn;Thepeptidese-瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。。quenceofHPPCn7_j3(IHLELRN)wasidentified