雞新城疫免疫抗體水平評價(jià)試驗(yàn).pdf

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1、Nong一一旦一_K曼一一．??—一一雞新城疫免疫抗體水平評價(jià)試驗(yàn)馬瑞(烏魯木齊市米東區(qū)畜牧獸醫(yī)站，鳥魯木齊831400)雞新城疫是養(yǎng)雞業(yè)最常見的一種急性高度接觸③pH值7．2、0．Ol摩爾／升PBS等滲液配制配性、敗血性傳染病。此病的特征是雞呼吸困難、下痢，制lxPBS：量取40毫升25xPBS，加入8．5克氯化神經(jīng)紊亂，黏膜和漿膜出血壞死，精神沉郁，離群呆鈉，加蒸餾水定容至1000毫升。立，突然采食減少或不食，飲欲增加，眼半閉或全閉，3．試驗(yàn)方法產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋減少或停產(chǎn)，呼吸困難，常排出黃綠色或參照GB／T18963—2

2、003(高致病性新城疫診斷技黃白色的稀糞，發(fā)病后期排出蛋清樣排泄物。病原剖術(shù)》中的血凝(HA)和血凝抑制(HI)試驗(yàn)進(jìn)行。檢．全身黏膜和漿膜出血。淋巴系統(tǒng)腫脹、出血和壞4．血凝試驗(yàn)(HA)(微量法)測定死。嗉囔內(nèi)有充滿臭味的稀薄液體和氣體，腺胃黏膜在微量反應(yīng)板的112孔均加入0．025毫升水腫，其乳頭或乳頭間有鮮亮的出血點(diǎn)，或有潰瘍或PBS，換滴頭，吸取0．025毫升病毒懸液(雞新城疫血壞死．腺胃和肌胃交界處有出血點(diǎn)。這是典型新城疫凝抑制試驗(yàn)抗原)加入第l孑L，混勻。從第1孔吸取的特征病變。雞新城疫對養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展危害嚴(yán)重

3、，典0．025毫升病毒液加入第2孑L，混勻后吸取0．025毫型雞新城疫的發(fā)病率和病死率可達(dá)9O％以上。升加入第3孑L，如此進(jìn)行倍比稀釋至第11孑L．從第一、材料與方法1l孔吸取0．025毫升棄之．換滴頭。每孔再加入1．試驗(yàn)材料0．025毫升PBS。每孔均加入0．025毫升體積分?jǐn)?shù)為①試驗(yàn)對象烏魯木齊市某養(yǎng)禽場雞新城疫免1％雞紅細(xì)胞懸液f將雞紅細(xì)胞懸液充分混勻后加疫后的ND抗體水平評價(jià)。入)。振蕩混勻，在室溫20～25?！?下靜置40分鐘后，觀②疫苗重組新城疫滅活疫苗。察結(jié)果。如果環(huán)境溫度太低或者太高，可置25℃溫箱③試劑

4、新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原，新城疫血環(huán)境下。對照孔紅細(xì)胞將成明顯的鈕扣狀沉到孔底。凝抑制試驗(yàn)陽性血清，1％雞紅細(xì)胞懸液，阿氏液，pH①結(jié)果判定將反應(yīng)板微傾斜，觀察紅細(xì)胞有值為7．2、0．01摩爾／升PBS等滲液等其他試劑自配。無呈淚滴狀流淌，完全血凝(不流淌)的抗原或病毒④試驗(yàn)器材一次性96孑LV型微量反應(yīng)板，移最高稀釋倍數(shù)代表1個血凝單位(HAU)。此試驗(yàn)中液器(25微升，500微升，1000微升)，替補(bǔ)頭，微量振抗原血凝效價(jià)為1：256。蕩器，臺式離心機(jī)，移液槽，燒杯，量筒，電子秤。②四單位抗原配制根據(jù)血凝(HA)試驗(yàn)結(jié)

5、果2．相關(guān)試劑配制配制4HAU病毒抗原。以完全血凝病毒最高稀釋倍①阿氏液(抗凝血)配制葡萄糖2．05克，檸檬數(shù)作為終點(diǎn)，終點(diǎn)稀釋倍數(shù)除以4即為含4HAU抗酸鈉0．80克，檸檬酸0．055克，氯化鈉0．42克，加蒸原稀釋倍數(shù)。所以，4HAU抗原稀釋倍數(shù)為1：64。餾水至100毫升，散熱溶解后pH值調(diào)至6．1，69千③血凝抑制(HI)試驗(yàn)(微量法)在微量反應(yīng)板帕、l5分鐘高壓滅菌。4℃保存?zhèn)溆?。l～ll孔加入0．025毫升PBS．第12孑L加入0．05毫升②1％雞紅細(xì)胞懸液制備用有抗凝劑的注射PBS。吸取0．025毫升被檢血

6、清加入第1孑L內(nèi)，充分器采血5～10毫升，將血液吸入離心管中，經(jīng)3000混勻后吸0．025毫升于第2孔，依次倍比稀釋至第轉(zhuǎn)離心5～10分鐘，吸取上清液和紅細(xì)胞上層白細(xì)胞1O孔．從第10孔吸取0．025毫升棄去。1～11孔均加薄膜，將沉淀的紅細(xì)胞加稀釋液洗滌，再加3000轉(zhuǎn)入含4HAU混勻病毒抗原液0．025毫升，室溫(約離心5～10分鐘，反復(fù)3次。將最后1次離心后的細(xì)20～25℃)靜置至少30分鐘。每孔加入0．025毫升胞泥按5％稀釋。體積分?jǐn)?shù)為1％雞紅細(xì)胞懸液混勻，靜置約40分鐘，70農(nóng)村科技2013(7)望一_C一一

7、曼一一一一室溫約2O～25℃。如果環(huán)境溫度太低或者太高，可置意稀釋血清時避免產(chǎn)生氣泡及將孔內(nèi)液體濺出．每25℃溫箱環(huán)境下．對照孑L紅細(xì)胞將呈明顯鈕扣狀沉孔稀釋次數(shù)也要嚴(yán)格保持一致。到孔底。②待檢血清要求必須新鮮、無雜質(zhì)、無紅細(xì)胞、④結(jié)果判定原則以完全抑制4個HAU抗原不腐敗，盛血清的離心管使用前需要高壓消毒。保證血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。只有陰性對照孔血血清存放時間，分離血清時應(yīng)有備份血清。清滴度不大于21og2，陽性對照孔血清誤差不超過12．發(fā)生新城疫的原因個滴度。試驗(yàn)結(jié)果才有效。HI價(jià)小于或等于31og2，判發(fā)生

8、新城疫的原因主要與早期感染、超強(qiáng)毒感定HI試驗(yàn)陽性：等于41og2為可疑，需重復(fù)試驗(yàn)；大染、免疫失敗、母源抗體的影響、變異病毒的出現(xiàn)和于或等于51og2為陰性。免疫抗體保護(hù)率達(dá)70％以免疫抑制性疾病的存在有關(guān)。上則認(rèn)為具有較強(qiáng)的免疫保護(hù)力。3．預(yù)防措施二、結(jié)果與分析①嚴(yán)格檢疫，發(fā)現(xiàn)病雞立即淘汰，飼養(yǎng)場地徹底被檢測96