淺談ELISA法檢測(cè)抗戊型肝炎病毒IgM抗體.pdf

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1、228世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘2013年第13卷第5期·醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)·淺談ELISA法檢測(cè)抗戊型肝炎病毒lgM抗體趙玉瑩(黑龍江省口腔病防治院，黑龍江哈爾濱150000)摘要：目的探討ELISA法檢測(cè)抗戊型肝炎病毒IgM抗體。方法運(yùn)用ELISA法檢測(cè)抗戊型肝炎病毒IgM抗體。結(jié)論檢測(cè)時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照說明書要求操作，防止交叉污染。關(guān)鍵字：檢測(cè)檢驗(yàn)；ELISA法；戊型肝炎病毒；抗體中圖分類號(hào)：R575．1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：BDOI：10．39698．issn．1671—3141．2013．05．1680引吾孔內(nèi)液體，再以洗滌液注滿各孔，靜置lmin后吸干，如此反復(fù)洗滌4次。將HEV蛋白結(jié)

2、構(gòu)區(qū)的3種重組抗原成分，包被于聚苯乙烯酶標(biāo)板的反應(yīng)孑L中，加入待測(cè)血清或血漿，經(jīng)孵育若4．4加酶標(biāo)記物存在特異性抗體將與固相的HEV抗原結(jié)合。充分沖洗反應(yīng)除空白孔外。其余孔各加lOOffl酶標(biāo)記物。孔以祛除未結(jié)合成分，再將辣根過氧化物酶標(biāo)記的鼠抗人4．5孵育及洗滌IgM抗體加入反應(yīng)孔中，酶結(jié)合物將結(jié)合到先前形成的抗原37℃水浴孵育30min，用洗板機(jī)洗板。洗板機(jī)先吸去板抗體復(fù)合物上，反復(fù)沖洗反應(yīng)孔，祛除未結(jié)合的酶結(jié)合物，孔內(nèi)液體，再以洗滌液注滿各孔靜置lmin后吸干，如此反然后向每孑L中加入底物液一一四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液。復(fù)洗滌5次。若反應(yīng)體系出現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)，表

3、明標(biāo)本中存在HEV特異性抗4．6加底物體，加入鹽酸終止呈色反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)加TMB底物100l／孔，37℃閉光顯色10min，加終定反應(yīng)體系的吸光度，吸光度與待測(cè)樣本中的特異性抗體止液50ul／孔。數(shù)量成正比。4．7檢測(cè)0D值1標(biāo)本采集用MK2酶標(biāo)儀比色，以450nm(單波長(zhǎng))或450nm／使用新鮮無抗凝或肝素鈉抗凝動(dòng)脈血或靜脈血2～3ml，630nmf雙波長(zhǎng))測(cè)各孔OD值。4．8結(jié)果審核離心(1500～3000r／rain)分離血清。不能立即測(cè)定的標(biāo)在LIS系統(tǒng)審核結(jié)果。本應(yīng)于2～8℃保存，但不應(yīng)超過3d。樣本中不可添加疊氮鈉防腐，因?yàn)榀B氮鈉會(huì)影

4、響辣根過氧化物酶的活性。5質(zhì)量控制2試劑5．1測(cè)定頻率2．1試劑來源每批標(biāo)本均設(shè)置陰、陽性對(duì)照及l(fā)臨界值質(zhì)控血清。s北京萬泰生物技術(shù)有限公司提供的戊型肝炎病毒IgM為樣品OD值，c0為臨界值(Cut—off)?？贵w診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)。5．2接受標(biāo)準(zhǔn)2．2試劑組成當(dāng)臨界值血清的s／c0值超出X±2S范圍時(shí)，系統(tǒng)處包被板12孔x8條，直接使用，按檢測(cè)所需人份取板于警告狀態(tài)，應(yīng)予注意；當(dāng)臨界值血清的s／c0值超出條量；陽性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清各160l／瓶，稀釋32±3S范圍時(shí)定為失控，則參照免疫科室內(nèi)質(zhì)控失控處理液100ml／瓶，TMB底物、終止液各30ml／瓶

5、，均直接使程序檢查失控原因。用，用前必須恢復(fù)至窒溫和完全搖勻，用后保存于28oC；5．3質(zhì)控檢測(cè)完成后，在ELISA項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控記錄表酶結(jié)合物70ml／瓶，用前根據(jù)標(biāo)本量將酶原液按1：200上登記質(zhì)控；參照Levey—jennings質(zhì)控圖控制，發(fā)現(xiàn)失控時(shí)填寫失控報(bào)告，查出失控原因并做相應(yīng)的處理。以標(biāo)本稀釋液配制成應(yīng)用酶結(jié)合物，酶原液用后保存于2—8℃；濃縮洗滌液120ml／瓶，用前以新鮮蒸餾水或去5．4質(zhì)控品于2～8℃保存，開封后需在1周內(nèi)用完。離子水稀釋25倍后備用，若有結(jié)晶，應(yīng)置室溫溶解后再稀使用前需置室溫20rain，并充分振蕩、搖勻。釋備用。6注意事項(xiàng)2-

6、3質(zhì)控品6．1用前試劑盒各組分應(yīng)在室溫中平衡后再開封啟用。為試劑盒提供的陰陽對(duì)照。6．2空白對(duì)照孔的吸光度應(yīng)≤0．100。每個(gè)陽性對(duì)照孑L3．儀器的吸光度與空白對(duì)照孔的吸光度的差值必須≥O．500。6．3陽性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的平均吸光度差值LD5—10B型離心機(jī)；2510變頻振蕩器；恒溫水浴箱；fRcx—NRcx)應(yīng)≥0．400，提示檢測(cè)結(jié)果可靠。否則應(yīng)懷EGATE一2310洗板機(jī)；MK3酶標(biāo)儀。疑技術(shù)問題，檢測(cè)必須重新進(jìn)行。4操作步驟6．4如果RCX—NRCX值持續(xù)偏低，應(yīng)懷疑試劑變質(zhì)。4．1加樣品稀釋液6．6未用完的包被板應(yīng)及時(shí)用自封袋封存。除空白~Lgl,，

7、各孔分別加入200l樣品稀釋液。6．7試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室4．2加樣檢查規(guī)程操作．不可用不同批號(hào)的試劑盒中的試劑相互代設(shè)空白1孔，陰、陽性對(duì)照各2孑L。除空白孔外，分別替。加入10l陰、陽性對(duì)照物。樣品孔加入10l樣品。6．8陰、陽性對(duì)照物、酶結(jié)合物、酶標(biāo)板必須固定匹4．3孵育及洗滌配使用。37℃水浴孵育30rain，用洗板機(jī)洗板。洗板機(jī)先吸去板(下轉(zhuǎn)第251頁)世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘2013年第l3卷第5期231療的患者血清樣本不適合用本方法進(jìn)行檢測(cè)?。層粘連蛋白(1aminin，LN)是一種大分子非膠原糖蛋白，6．4發(fā)生嚴(yán)重溶血、脂血或渾