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1、6中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(AcadJSUMS),2000,21(4S):6～9,59小鼠成肌細(xì)胞的培養(yǎng)純化和鑒定方法王訓(xùn),張成,劉焯霖,陳國俊(中山醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,廣東廣州510080)摘要:【目的】建立體外成肌細(xì)胞分離培養(yǎng)、純化和鑒定方法。【方法】40只小鼠分10次采用分離消化法培養(yǎng)成肌細(xì)胞,分別用A、B、C、D4組不同培養(yǎng)液培養(yǎng),以Ficoll梯度液純化,進(jìn)行Desmin免疫組化鑒定?！窘Y(jié)果】成肌細(xì)胞培養(yǎng)后經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)檢查成活率達(dá)95%以上,在接種后4～5d增殖達(dá)高峰,A、B、C3組培養(yǎng)液對成肌細(xì)胞的培養(yǎng)效果無差
2、異。Ficoll分離純化的成肌細(xì)胞純度較高,有97%的成肌細(xì)胞Desmin胞漿呈陽性反應(yīng)?！窘Y(jié)果】采用Ficoll純化以國產(chǎn)血清培養(yǎng),可獲得高產(chǎn)量高純度的成肌細(xì)胞。關(guān)鍵詞:成肌細(xì)胞;細(xì)胞培養(yǎng);純化;免疫細(xì)胞化學(xué)中圖分類號(hào):R373.23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1000-257X(2000)04S0-0006-04Identification,PurificationandCultureofMouseSkeletalMuscleCellWANGXun,ZHANGCheng,LIUZhuo-lin,CHENGuo-jun(D
3、epartmentofNeurology,FirstAffiliatedHospital,SunYat-senUniversityofMedicalSciences,Guangzhou510089,China)Abstract:【Objective】Toestablishapracticalmethodsoftheculture,purificationandidentificationofmousemyoblastsinvitro.【Methods】Musclesamplesof40miceweremincedandd
4、igestedwithtrypsin,cul-turedwithfourkindsofmedianamelyA,B,C,andD,finallypurifiedwithFicollgradientliquid.Myogenesisweredynamicallyobserved,myoblastweretestedbyDesminimmunohistochemistrystains.【Result】Themy-oblastcellviabilityisupto95%byTrypanblue,thecellprolifera
5、tionarrivedclimaxduring4～5dayafterplanted.ThereisnodifferencebetweenA,B,andCcultureliquid.Thecellpurityisupto97%byDesminim-munohistochemicalstainstest.【Conclusion】MyoblastscouldbepurifiedbyFicollandculturedwithDMEMcul-tureliquidcontainedserummadeinourcountry,inhi
6、ghquantity.Keywords:myoblast;cellculture;purification;immunocytochemistryDuchenne型肌營養(yǎng)不良癥(Duchennemuscular純度是原因之一,為此我們建立了成肌細(xì)胞分離培dystrophy,DMD)是一種以骨骼肌進(jìn)行性變性、壞養(yǎng)和純化方法,并對其生物學(xué)特征進(jìn)行鑒定。死為主要病理特征的致死性的X-性連鎖隱性遺傳性肌病。由于肌細(xì)胞膜上的抗肌萎縮蛋白(dys-1材料與方法trophin)的缺乏或結(jié)構(gòu)變異,引起肌細(xì)胞膜的形態(tài)和功能損害,致使肌纖維
7、變性壞死。臨床缺乏有效1.1實(shí)驗(yàn)材料的治療方法。近年來,成肌細(xì)胞移植治療(myoblastD-Hanks液:自備。DMEM培養(yǎng)基:Gibco-transfertherapy,MTT)DMD在實(shí)驗(yàn)和臨床研究已BRL公司提供。胎牛血清:Gibco-BRL公司、浙江取得一定進(jìn)展,是目前唯一能將人類自然基因組完杭州四季青生物制品公司提供。胰蛋白酶和膠原[1]整轉(zhuǎn)移的方式。文獻(xiàn)報(bào)道MTT實(shí)驗(yàn)失敗的原酶:Sigma公司提供。青、鏈霉素:國產(chǎn)。Ficoll-[2]因很多,其中體外培養(yǎng)的成肌細(xì)胞的融合能力和400:Pharmacia公司
8、提供。結(jié)蛋白(desmin)抗體:收稿日期:2000-03-16基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(39870804);廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(970061);衛(wèi)生部臨床學(xué)科重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(97040229)作者簡介:王訓(xùn)(1966-),男,安徽合肥人,博士生,主治醫(yī)師,講師.第4S期王訓(xùn),等.小鼠成肌細(xì)胞的培養(yǎng)純
