常用液相色譜柱原理.ppt

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1、常用液相色譜柱使用與保養(yǎng)SOP1.2液相色譜柱的結(jié)構(gòu)及其主要功能液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。柱管：多用不銹鋼制成，若果使用時柱壓不高于70kg/cm2時，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。壓帽：即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。密封環(huán)：位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。1.3.5常用液相色譜柱主要應(yīng)用范圍與特點匯總1.3.5.1反相色譜柱柱填

2、料類型主要應(yīng)用范圍特點C18（ODS）可分離多種化合物，最適合用于極性樣品或做離子抑制的樣品的分析普適性好；保留性強，用途廣；可用于正相。C8（辛基）與C18相似與C18相似，但保留值稍小C3，C4多用于肽類與蛋白質(zhì)保留值更小C1[三甲基單氯硅烷(TMS)]普通反相溶劑分析疏水性強的化合物；使用高水含量溶劑分析高極性化合物；分離多功能團化合物保留值最??；最不穩(wěn)定；可用于反相與正相苯基，苯乙基多用于分離分析同時含極性和非極性芳香化合物的混合物保留值適中；選擇性有所不同，對極性芳香化合物選擇性更強；可用于正相。1.3.5.2正相色譜柱柱填料

3、類型主要應(yīng)用范圍特點CN（氰基）適用于在ODS上無保留或分離時間太長的組分的分離，以及樣品中同時含有親水與疏水性化合物而在ODS上色譜優(yōu)化困難的場合，也可用于氨基酸分析。屬中等級性柱，普適性好；保留適中，可用于正相與反相。NH2（氨基）主要用于分析單糖類、烴類化合物保留性弱；極性大，不穩(wěn)定，酸性條件下易水解；亦可用于反相。OH（二醇基，DIOL）多用于有機酸、肽類與蛋白質(zhì)分析極性大于CN，小于NH2，常做HILIC用。可反相用。高純硅膠柱多用于制備LC，適用于多種化合物普適性好；價廉；操作不太方便；pH窄（2-7.5）；次級保留效應(yīng)強（

4、硅羥基），易峰拖尾或前延，分叉等。1.3.5.3聚合物基質(zhì)柱（eg.聚苯乙烯柱）單獨的聚苯乙烯類填料柱主要用于分離蛋白質(zhì)類等大分子化合物，多用于GPC、GFC、MEC等；若與離子交換基團共鍵則形成離子交換柱，用于分離酸性化合物（磺酸基團）、堿性合物（季銨基團）及藥物代謝產(chǎn)物等。特點：在1＜PH＜13的流動相中穩(wěn)定；分離峰形較好，柱子壽命較長。1.3.5.4其他無機物填料柱如氧化鋁、石墨化碳、氧化鋯、硅藻土等，主要作制備色譜用。柱填料類型主要應(yīng)用范圍特點Chiral（手性柱）常用于分離手性異構(gòu)體，根據(jù)分離不同機理選擇。不同化學(xué)性質(zhì)的異構(gòu)體

5、需采用不同類型的手性柱。部分亦可用于反相。HILIC（親水作用柱）最常用Diol柱、丙基酰胺基鍵合硅膠柱，多用于分析極性化合物、端基異構(gòu)體、如藥物極性代謝產(chǎn)物、多肽、有機酸、糖類等。多用于ELSD檢測，C18無保留化合物，毒品檢查等?？捎糜诜聪?。1.4液相色譜柱制備工藝簡述不同品牌色譜柱制備工藝各異，但都可歸納為如下流程（以硅膠柱為例）：硅烷化硅膠制備（四乙氧基硅烷脫乙基與聚合）→Si-OH基暴露（脫乙基，置換成H）→海綿狀多孔硅膠構(gòu)造（物理勻質(zhì)過程）→官能團鍵合（各種官能團與Si-OH鍵合）→端基封口（對殘余的Si-OH用小分子的氯-

6、甲基、氯-乙基鍵合）→潤濕混合（加乙醇等調(diào)勻，其配方各廠家均有專利保護）→裝填（機械裝填或手工裝填，層層裝填，壓緊，潤濕）→高壓平衡（軸向加壓或徑向加壓，各廠家均有專利保護）→干燥（此步為關(guān)鍵工藝步驟，各廠家均有專利保護）→削平→組件安裝→預(yù)平衡→柱效測試流動相平衡→柱效測試→封口→包裝1.5液相色譜柱分離機理概述色譜柱類型分離機理備注常規(guī)反相柱相似相溶常規(guī)正相柱相似相溶離子交換柱樣品離子與色譜柱離子達到置換動態(tài)平衡要關(guān)注pH條件手性柱（Chiralcolumn）氫鍵作用、偶級-偶級作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用、空間作用一般，A

7、GP、HSA、BSA等以疏水作用、空間作用為主。親水性色譜柱（HILIC）氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級效應(yīng)及相似相溶基于NP原理氨基酸分析柱相似相溶基于RP原理2、常用液相色譜柱使用方法與維護保養(yǎng)(1)認識色譜柱規(guī)范化使用與保養(yǎng)的必要性：延長色譜柱使用壽命，降低色譜柱使用成本，逐步提高分析人員色譜柱使用與維護水平，確保試驗數(shù)據(jù)的準確性、可靠性和重現(xiàn)性，提升個人在色譜領(lǐng)域的競爭力。(2)熟悉幾個概念：液相色譜柱：指用于液相色譜分離的柱形固定相，由柱管、壓帽/卡套、篩板（濾片）、填料、接頭等組合而成，可用于液相色譜分析與制備。色譜

8、柱再生：指色譜柱在非正常情況下，針對異?，F(xiàn)象及原因采取的一系列修復(fù)補救措施，以提高色譜柱柱效和延長其使用壽命的處理過程。運載溶劑（ShippingSolvent）：指色譜柱生產(chǎn)廠商在柱出廠測試合格后飽和于色