雞胚絨毛屎囊膜試驗(yàn)用于化妝品的體外眼刺激性評價(jià).pdf

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1、第36卷第9期日用化學(xué)品科學(xué)V01．36No．92013年9月DETERGENT&COSMETICSSep．2013雞胚絨毛屎囊膜試驗(yàn)用于化妝品的體外眼刺激性評價(jià)陸澤安，鄭賽華，吳越，馬來記，魏少敏(上海家化聯(lián)合股份有限公司，上海201702)摘要：采用雞胚絨毛尿囊膜(HET—CAM)試驗(yàn)評價(jià)了66種不同品類化妝品篩選配方或終配方產(chǎn)品的眼刺激性，并與家兔眼刺激試驗(yàn)結(jié)果比較，考察HET—CAM試驗(yàn)的可靠性，并建立本實(shí)驗(yàn)室該方法的化妝品產(chǎn)品眼刺激性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。家兔眼刺激試驗(yàn)結(jié)果表明，66個(gè)樣品中有6個(gè)樣品具有微刺

2、激性，4個(gè)樣品為輕刺激性，其余樣品均無眼刺激性。按照國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)，HET—CAM法共有38個(gè)樣品為眼刺激陽性，假陽性率50．0％，假陰性率為0，靈敏度為100％，特異度為66．7％。如果采用≤4分為眼刺激陰性，>4分為眼刺激陽性的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，則66個(gè)樣品中有29個(gè)樣品為眼刺激陽性，37個(gè)樣品為眼刺激陰性，靈敏度為100％，特異度提高至74．7％，假陰性率為0，假陽性率降低至33．9％。結(jié)果顯示，HET—CAM試驗(yàn)用于化妝品產(chǎn)品的體外眼刺激性評價(jià)時(shí)，可采用刺激積分≤4分為無眼刺激，>4

3、分為眼刺激性陽性的判斷標(biāo)準(zhǔn)。關(guān)鍵詞：化妝品；雞胚絨毛尿囊膜；眼刺激性；替代試驗(yàn)中圖分類號(hào)：TQ658文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1006—7264(2013)09—0020—07長期以來，化妝品的眼刺激性一直采用家兔眼1材料和方法刺激試驗(yàn)(Draizetest)進(jìn)行評價(jià)。在全球化的動(dòng)物保護(hù)運(yùn)動(dòng)的影響下，發(fā)達(dá)國家普遍開展了以替代、1．1受試樣品減少和優(yōu)化為核心的“3R”運(yùn)動(dòng)【lj，體外替代試驗(yàn)將全部樣品均來源于上海家化配方部門送檢的篩選逐步取代動(dòng)物試驗(yàn)。而體外替代試驗(yàn)方法有多種，配方或終配方樣品，共66個(gè)樣品。其

4、中，油類樣品包括離體器官方法(離體牛眼、雞眼和兔眼等)、器4個(gè)、水類樣品10個(gè)、精華液4個(gè)、眼霜11個(gè)、護(hù)官型方法(雞胚)、細(xì)胞學(xué)方法以及重組三維人角膜發(fā)素2個(gè)、香波14個(gè)、沐浴露21個(gè)。均密閉、室溫上皮細(xì)胞模型等。雞胚絨毛尿囊膜試驗(yàn)(hen’segg下保存，試驗(yàn)前將樣品置于雞胚孵化箱中保溫至少testonthechorioallantoicmembrane，HET—CAM)由1h，試驗(yàn)時(shí)對樣品不做任何處理，直接使用原樣品，Luepke于1985年建立圄，利用其尿囊膜與眼結(jié)膜組每次取樣后仍將樣品置于雞胚孵化

5、箱中繼續(xù)保溫。織結(jié)構(gòu)類似的特點(diǎn)，通過觀察尿囊膜暴露于受試物1．2雞胚質(zhì)后血管的刺激反應(yīng)，計(jì)算刺激分值對受試物進(jìn)行白萊杭雞(whitelaghornchicken)受精雞胚，購評價(jià)。該方法雖具有操作簡便、費(fèi)用較低和重現(xiàn)性自上海歸興家禽有限公司，普通級(jí)，購回后置Rcom好等特點(diǎn)，但該法用于化妝品產(chǎn)品眼刺激性評價(jià)仍MARUMAX孵化箱中氣室端朝上，在溫度為沒有統(tǒng)一的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。本研究采用HET—CAM對6637．6℃±0．1℃、相對濕度為46％±1％的條件下孵種化妝品產(chǎn)品進(jìn)行體外眼刺激性評價(jià)，并與家兔眼化，每小時(shí)水

6、平方向傾斜45度自動(dòng)翻蛋一次，自動(dòng)刺激試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，觀察了HET—CAM法所得結(jié)換氣，孵化至第1O天時(shí)用于試驗(yàn)。果的可靠性，并對該法用于化妝品產(chǎn)品眼刺激性的1．3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行探討。新西蘭大耳白兔，普通級(jí)，雌雄兼用(雌性未孕)，收稿日期：2013—07—10作者簡介：陸澤安(1962一)，男，湖南人，醫(yī)學(xué)博士?！?0·第9期陸澤安，鄭賽華，吳越，馬來記，魏少敏：雞胚絨毛尿囊膜試驗(yàn)用于化妝品的體外眼刺激陛評價(jià)購自中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，score，IS)[59：并飼養(yǎng)在該中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)

7、物合格證：SCXK(滬)IS=(301—5H)×5÷300+(301一sO×7÷3002007----0003號(hào)，室內(nèi)溫度25oC±2~C，空氣與大氣+(301一sO×9÷300相通，喂普通兔飼料及蔬菜，自由飲用自來水，均式中：S：出血的初始時(shí)間；S：血管融解的初始時(shí)間；單籠飼養(yǎng)。S：凝血的初始時(shí)間。1．4家兔眼刺激試驗(yàn)[31每個(gè)樣品均用6個(gè)雞胚試驗(yàn)。最后，根據(jù)每個(gè)雞試驗(yàn)前一天，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的2只眼睛進(jìn)行檢查胚所得的Is計(jì)算平均刺激積分，并按表1所示對樣(包括使用熒光素鈉檢查)。如有眼睛刺激癥狀、角品的眼刺激

8、性進(jìn)行分級(jí)評價(jià)。膜缺陷和結(jié)膜損傷的動(dòng)物予以淘汰。試驗(yàn)時(shí)，取1只表1反應(yīng)時(shí)間法受試樣品眼刺激性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)家兔，輕輕拉開家兔一側(cè)眼睛的下眼瞼，將受試物Tab．1Gradingstandardofeyeirritaneywithirritationscoremethod0．1mL滴人結(jié)膜囊中，使上、下眼瞼被動(dòng)閉合1S，以防止受試物流失，另一側(cè)眼睛不作任何處理，作平均刺激積分眼刺激性分級(jí)為自身對照。滴人受試物后24h內(nèi)不沖