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1、第十四章免疫細胞的分離及其表面標志檢測技術第一節(jié)???????????免疫細胞的分離一、???????外周血單個核細胞分離二、???????淋巴細胞的分離三、???????T細胞和B細胞的分離四、???????T細胞亞群的分離第二節(jié)淋巴細胞標志及亞群分類一、?Ｔ細胞表面標志及亞群二、B細胞表面標志三、?NK細胞表面標志第三節(jié)其他的免疫細胞第四節(jié)免疫細胞表面標志的檢測及應用一、??免疫細胞表面標志的檢測方法二、?淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義思考題小結第一節(jié)免疫細胞的分離外周血單個核細胞分離淋巴細胞的
2、分離T細胞和B細胞的分離T細胞亞群的分離一、外周血單個核細胞分離外周血單個核細胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴細胞和單核細胞（monocyte）。Ficoll分離液法主要用于分離外周血中的單個核細胞，是一種單次差速密度梯度離心的分離法。細胞分離基本原理不同細胞密度不同不同細胞表面生物學特性不同不同細胞表面分化抗原不同不同細胞密度不同人的紅細胞密度為1.093粒細胞密度為1.092單個核細胞（淋巴細胞和單核細胞）的密度為1.075-1.090不同細胞密度不同
3、用1.077±0.001的分層液可將細胞分離密度梯度離心(Ficoll)離心二、淋巴細胞分離貼壁粘附法吸附柱過濾法磁鐵吸引法Percoll分離液法（連續(xù)密度梯度離心）（去單核細胞）E花環(huán)沉降法尼龍毛柱分離法三、T細胞和B細胞的分離四、T細胞亞群的分離親和板結合分離法磁性微球分離法熒光激活細胞分離儀分離法熒光激活細胞分離儀分離法磁珠大小可以選擇大小免疫磁珠分離細胞的特點比較比較項目大磁珠小磁珠對細胞的影響對細胞造成機械壓力，影響其生物學活性，不利于分離后培養(yǎng)。對細胞溫和，不影響分離細胞的后續(xù)培養(yǎng)。對流
4、式細胞儀的影響阻塞流式細胞儀的噴嘴，影響散射光。可直接上流式細胞儀檢測，不影響散射光。分離條件要求技術簡單，分離可在試管中完成。需要很強的磁場來分離細胞。收率得率高。得率不高。純度純度低。純度高。分離時間分離速度快。分離速度慢。分離成本成本低。需要很強的磁場來分離細胞，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進行。免疫磁珠法細胞分選過程免疫磁珠細胞分選裝置全自動細胞分選系統(tǒng)流式細胞分析儀第二節(jié)淋巴細胞標志及亞群分類常用于鑒定和檢測淋巴細胞表面標志是簇分化抗原（Clusterofdifferentiatio
5、n，CD）。細胞表面分化抗原（CD抗原）適用于T、B細胞的分離已知CD抗原細胞亞群的分離未知CD抗原細胞亞群的分離（陰性分選）一、T細胞表面標志及其亞群CD3+CD4+CD8-輔助性T細胞（helpTcell,Th）CD3+CD4-CD8+細胞毒性T細胞（cytotoxicTcell,TcorCTL）CD4+CD25+調節(jié)性T細胞（regulatoryTcell,TrorTreg）二、B細胞表面標志SmIg、Fc受體、補體受體、EB病毒受體，部分CD分子是B細胞的重要表面標志，其中以SmIg為B細胞
6、所特有，是鑒定B細胞可靠的指標。CD19/CD5分子：可將B細胞區(qū)分為B1細胞和B2細胞，B1細胞為CD19和CD5雙陽性，而B2細胞僅為CD19陽性，B2細胞為通常所指的B細胞。三、NK細胞表面標志人類NK細胞表面標志主要以CD16、CD56來認定，臨床上將CD3-CD56+CD16+淋巴細胞認定為NK細胞。T細胞及NK細胞第三節(jié)其他的免疫細胞抗原提呈類細胞表面標志第四節(jié)免疫細胞表面標志的檢測及應用免疫細胞表面標志的檢測方法淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義一、免疫細胞表面標志的檢測抗體致敏細胞花環(huán)法
7、免疫細胞化學法免疫熒光法流式細胞分析法二、淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義淋巴細胞表面標志檢測是評價免疫功能的重要指標。對CD4+和CD8+T細胞的測定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反應的監(jiān)測。臨床常見疾病中的T淋巴細胞的變化思考題1.免疫細胞都包括哪些細胞？為什么要將其分離純化？2.淋巴細胞有哪幾類細胞？能用形態(tài)學的方法加以區(qū)別嗎？3.將細胞分離的原理有哪些？各有什么特點？4.形態(tài)學相同的一類細胞為什么還要分亞群？5.T細胞和B細胞進一步區(qū)分亞群的依據(jù)是什么？6.什么是細胞表面標志？
8、其作用是什么？7.細胞表面標志的檢測方法有哪些？8.利用細胞表面標志（CD抗原）分離細胞的方法有哪幾種？9.T細胞、B細胞、NK細胞、單核細胞的主要生物標志是什么？10.淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義是什么？小結淋巴細胞并不是功能單一的群體，但其在光學顯微鏡下的形態(tài)基本是一樣的，因此要對其進行進一步的分類和觀察就不能采用形態(tài)學的方法，而要依靠對其表面標志的檢測。常用于鑒定和檢測計數(shù)淋巴細胞的表面標志是CD抗原。進一步區(qū)分淋巴細胞亞群可使某一類淋巴細胞的功能趨向一致和單
