球孢白僵菌營養(yǎng)需求及培養(yǎng)條件課件.ppt

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1、球孢白僵菌營養(yǎng)需求及培養(yǎng)條件研究報告人：姚珺玥1.研究背景2.研究內容3.研究方法4.主要結果與結論5.討論1.研究背景球孢白僵菌(Beauveriabassiana)(以下簡稱白僵菌)是一種常見的昆蟲病原真菌,具有寄主范圍廣,致病力強,對人畜林木作物無毒害,不傷天敵,不污染環(huán)境等特點，長期以來被用做生物防治害蟲的重要手段。到目前為止,已被開發(fā)的白僵菌制劑有粉劑、可濕性粉劑、顆粒劑、油劑、乳劑、膠囊劑等。白僵菌油劑由于具有粘著力強,滲透性好,能破壞蟲體表面蠟質層和幾丁質層,利于芽管侵入的特點,使得其成為白僵菌主要的研發(fā)劑型。2.研究內容選用經生物測定毒力強的分離自馬尾

2、松毛蟲的Bb13為菌株,從有關生物學研究著手,將菌株基礎培養(yǎng)制備白僵菌孢子粉的營養(yǎng)需求及培養(yǎng)條件進行正交組合實驗,通過分析比較所得孢子的含孢量和萌發(fā)率,旨在篩選出生產高質量白僵菌孢子粉的營養(yǎng)需求及培養(yǎng)條件,為提高白僵菌孢子粉質量和抗逆性做出研究。3.研究方法1.接種及培養(yǎng)2.含孢量測定3.萌發(fā)率測定3.1接種及培養(yǎng)將經活化的菌種接入種子培養(yǎng)基,在(25±1)℃的搖床上振蕩(170r/min)培養(yǎng)4d。培養(yǎng)液均勻地涂抹于表面平鋪有無菌玻璃紙的SDAY培養(yǎng)基上(40個皿),傾去產孢培養(yǎng)基表面多余的培養(yǎng)液,并將培養(yǎng)皿用保鮮膜密封。將接過種的培養(yǎng)皿置于(25±1)℃的無菌培養(yǎng)

3、箱中培養(yǎng)5d,待產孢培養(yǎng)基表面長滿菌絲時揭去保鮮膜,再培養(yǎng)4~6d使菌絲大量產孢,然后人工收獲培養(yǎng)基表面的孢子粉,在常溫下通風處晾干后貯存于密封塑料袋中,并放于4℃的冰柜中保存。3.2含孢量測定含孢量測定:稱取20g待測孢子粉于50ml0.5%Tween-80無菌溶液中,用高速分散器分散均勻,稀釋，搖勻后立即用血球板計數測定孢子懸浮液的濃度,每種待測孢子粉的測定重復5次,計算孢子粉的平均含孢量。3.3萌發(fā)率測定將待測孢子粉用0.5%Tween-80無菌溶液配成濃度為107個孢子/ml的懸浮液,吸取1ml加入到盛有9ml萌發(fā)營養(yǎng)液(蛋白胨0.5%、蔗糖1%、另加0.5%

4、OP)的小三角瓶中,(25±1)℃振蕩(120r/min)培養(yǎng)24h后,用血球計數器計數液樣中發(fā)芽和未發(fā)芽的孢子數,重復取樣測定3次,計算平均萌發(fā)率,即為孢子粉的活孢率。孢子萌芽的標準為可見芽管長度等于或者大于孢子直徑。4.主要結果與結論4.1.1碳源因素對孢子質量指標的影響就含孢量而言,碳源以葡萄糖(A1)最好,添加葡萄糖的培養(yǎng)基所產孢子的含孢量達到3.23×1011/g,其次是蔗糖,以添加乳糖的效果最差,含孢量僅為1.87×1011/g;就萌發(fā)率而言,也是以添加葡萄糖效果最好,使得孢子萌發(fā)率達到88.41%,其次為乳糖,以添加蔗糖和淀粉的效果較差,萌發(fā)率僅分別為8

5、5.67%和85.68%。4.1.2氮源因素對孢子質量指標的影響就含孢量而言,由圖3可知,各氮源因素的影響差異不是特別顯著,其中,以添加蛋白胨(B4)對提高的含孢量效果最好,使含孢量達到2.99×1011/g,其次是硝酸鉀,以添加尿素的效果最差,含孢量僅為2.04×1011/g;就萌發(fā)率而言,由圖4可知,以添加甘氨酸和蛋白胨的效果為最好,分別使孢子萌發(fā)率達到88.48%和88.07%,以添加硝酸鉀的效果最差,孢子萌發(fā)率僅為84.96%。4.1.3不同微量元素對孢子質量指標的影響由圖5和6可知,微量元素對孢子含孢量和萌發(fā)率影響的趨勢基本相同,都是以Zn(E3)的效果最好

6、,使得孢子的含孢量和萌發(fā)率分別達到2.91×1011/g和88.68%,其次是Cu,都以微量元素Fe和Mn的效果最差,尤以Fe對孢子萌發(fā)率的效果最差,它明顯使得孢子萌發(fā)率低于其他微量元素。4.2培養(yǎng)條件對孢子質量指標的影響由圖7和8可知,和孢子所需的營養(yǎng)因子一樣,孢子的培養(yǎng)條件也明顯影響孢子的質量指標,就含孢量而言,培養(yǎng)溫度為20~25℃對提高孢子含孢量有明顯地效果,尤以20℃(C2)為最好,在該溫度下,孢子含孢量達到3.30×1011/g,15℃和30℃對提高孢子的含孢量很不利,培養(yǎng)環(huán)境中的pH值對孢子含孢量影響也很大,孢子含孢量達到較高水平的pH值在7(E3)左右

7、,此時孢子含孢量達到2.91×1011/g;就萌發(fā)率而言,溫度和pH值對其影響的趨勢差不多,都在因素2即溫度為20℃(C2)、pH在6(E2)達到最高,分別為94.53%和89.63%,溫度在15℃、pH在8左右萌發(fā)率最低。4.3五個因素對孢子質量指標的綜合影響碳源(A)、氮源(B)、溫度(C)、Ph(D)及微量元素(E)五個因素對球孢白僵菌孢子含孢量和萌發(fā)率的影響可見表2,就含孢量而言,五個因子中,溫度的極差值最大,為1.67,其次是碳源和pH值,微量元素的極差值最小,僅為0.90,這說明對含孢量影響最大的因素是溫度,其次是碳源和pH值,微量元素對