血球計(jì)數(shù)板法.doc

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1、血球計(jì)數(shù)板細(xì)胞計(jì)數(shù)法細(xì)胞計(jì)數(shù)法是用來(lái)計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中細(xì)胞數(shù)量的一種方法。一般利用計(jì)數(shù)板（血球計(jì)數(shù)板）進(jìn)行。即可用于分離（散）細(xì)胞培養(yǎng)接種前計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，也可用于對(duì)培養(yǎng)物的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)。不論計(jì)數(shù)的對(duì)象如何，均須制備分散的細(xì)胞懸液。一、步驟1、制備細(xì)胞懸液：對(duì)于懸液培養(yǎng)的細(xì)胞，可直接進(jìn)行下面的步驟2（計(jì)數(shù)與計(jì)算過(guò)程）。如果計(jì)數(shù)對(duì)象為貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，首先需將培養(yǎng)物按如下步驟制備成細(xì)胞懸液。1）、終止培養(yǎng)，將培養(yǎng)液吸出，用PBS洗培養(yǎng)物一次。2）、給培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入1ml0.25％胰蛋白酶溶液，于37

2、℃消化3～5min。期間不斷在鏡下觀察。當(dāng)細(xì)胞變圓接近脫壁時(shí)，棄消化液。3）、加入一定量的培養(yǎng)液（如果這些培養(yǎng)細(xì)胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使細(xì)胞脫壁而制成細(xì)胞懸液。2、計(jì)數(shù)與計(jì)算過(guò)程1）、在細(xì)胞計(jì)數(shù)板中央放置計(jì)數(shù)專(zhuān)用的蓋玻片。2）、用玻璃虹吸管吸取細(xì)胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計(jì)數(shù)板凹蹧處流出懸液，至蓋玻片被液體充滿為止。3）、置顯微鏡下計(jì)數(shù)四角大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)。對(duì)于壓線的細(xì)胞只計(jì)數(shù)在上線和左線者，對(duì)于細(xì)胞團(tuán)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)。4）、按下式計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液的密度：細(xì)胞密度＝（4個(gè)大格細(xì)胞總數(shù)/4）×10

3、4個(gè)/ml。二、注意事項(xiàng)：1）、務(wù)必使分散成單個(gè)細(xì)胞，取樣計(jì)數(shù)前，充分混勻細(xì)胞懸液。2）、顯微鏡下計(jì)數(shù)時(shí)，遇到2個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算。如果細(xì)胞團(tuán)>10％，說(shuō)明細(xì)胞分散不充分。三、顯微鏡下血球計(jì)數(shù)板如下圖：