雙倒數(shù)作圖法米氏方程.doc

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1、米氏方程與雙倒數(shù)作圖法(Lineweaver-Burkplot)米氏方程（Michaelis-MentenEquation）或米曼氏動(dòng)力學(xué)（Michaelis-Mentenkinetics）是由LeonorMichaelis和MaudMenten在1913年提出，是酶學(xué)中極為重要的可以描述多種非變異構(gòu)酶動(dòng)力學(xué)現(xiàn)象、表示一個(gè)酶促反應(yīng)的起始速度V（有些資料中也稱為Vo）與底物濃度[S]關(guān)系的速度方的方程，米氏方程形式如下：其中，Vmax表示酶被底物飽和時(shí)的反應(yīng)速度，Km值稱為米氏常數(shù)，是酶促反應(yīng)速度V為最大酶促反應(yīng)速度值一半

2、時(shí)的底物濃度。在酶促反應(yīng)中，底物情況在低濃度下，反應(yīng)相對(duì)于底物是一級(jí)反應(yīng)（firstorderreaction）；而當(dāng)?shù)孜餄舛忍幱谥虚g范圍時(shí)，反應(yīng)（相對(duì)于底物）是混合級(jí)反應(yīng)（mixedorderreaction）；當(dāng)?shù)孜餄舛仍黾訒r(shí)，反應(yīng)由一級(jí)反應(yīng)向零級(jí)反應(yīng)（zeroorderreaction）過(guò)渡；當(dāng)?shù)孜餄舛萚S]逐漸增大時(shí)，速度V相對(duì)于[S]的曲線為一雙曲線。下圖為米氏方程的模擬作圖：酶促反應(yīng)中的米氏常數(shù)的測(cè)定和Vmax的測(cè)定有多種方法。比如固定反應(yīng)中的酶濃度，然后測(cè)試幾種不同底物濃度下的起始速度，即可獲得Km和Vma

3、x值。但直接從起始速度對(duì)底物濃度的圖中確定Km或Vmax值是很困難的，因?yàn)榍€接近Vmax時(shí)是個(gè)漸進(jìn)過(guò)程。因此，通常情況下，我們都是通過(guò)米氏方程的雙倒數(shù)形式來(lái)測(cè)定，即Lineweaver-Burkplot，也可稱為雙倒數(shù)方程(double-reciprocalplot)：將1/V對(duì)1/[S]作圖，即可得到一條直線，該直線在Y軸的截距即為1/Vmax，在X軸上的截距即為1/Km的絕對(duì)值。示意圖如下：