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1、專(zhuān)業(yè)前沿知識(shí)講座綜述論文假單細(xì)胞株M18專(zhuān)業(yè)：生物工程姓名：陳瑩學(xué)號(hào)：20103304論點(diǎn)論證(50)邏輯性(20)參考文獻(xiàn)(20)書(shū)寫(xiě)格式(10)論文成績(jī)(10())評(píng)閱人假單胞菌株M18(Pseudomonassp.M18)是從上海郊區(qū)甜瓜根際分離篩選到的一株具有生物防治功能的假單胞菌新種，其生防作用部分歸功于其分泌的包括】假單胞菌株M18(Pseudomonassp.M18)是從甜瓜根際十.壤屮分離獲得的一株對(duì)多種植物病原菌具有顯著拮抗作用的菌株，在菌群傳感(quorumsensing)系
2、統(tǒng)的調(diào)控下，能分泌吩嗪■竣酸(PCA)以及多種吩嗪(phz)類(lèi)衍生物的抗真菌物質(zhì)。全局性因了GacA是MI8菌株吩嗪類(lèi)物質(zhì)的合成與菌群傳感系統(tǒng)的重要調(diào)控因了，木文將就GacA對(duì)上述兩者的調(diào)控做進(jìn)一步研究?！痉椒ā縋CR基因擴(kuò)增和測(cè)序研究Ml8菌株屮PCA合成基因簇，運(yùn)用RT-PCR及構(gòu)建phzA-lacZ轉(zhuǎn)錄融合手段研究M18菌株屮兩個(gè)phz基因簇備白的轉(zhuǎn)錄特征以及受全局性因了GncA的調(diào)控作用，運(yùn)用翻譯融合手段進(jìn)一步研究M18菌株中GacA對(duì)菌群傳感系統(tǒng)的調(diào)控作用?！窘Y(jié)果】M18菌株的染色體屮
3、存在著兩個(gè)PCA合成基因簇phzAl-Gl和phzA2-G2,與銅綠假單胞菌株(P.aeruginosa)PAOl的一致性達(dá)99%。但是,M18菌株phzA2-G2基因簇下游的非編碼區(qū)與PAO1菌株不同，存在著三段單位長(zhǎng)度為144bp的重復(fù)序列;在野生菌株M18+,phzAl-Gl的轉(zhuǎn)錄水平明顯高于phzA2-G2,GacA促進(jìn)phzAl-Gl轉(zhuǎn)錄，抑制phzA2-G2轉(zhuǎn)錄，區(qū)別性地調(diào)控兩個(gè)phz基因簇的轉(zhuǎn)錄,GacA在整體上抑制phz基因簇的轉(zhuǎn)錄，與PAO1菌株屮,GacA對(duì)phz的調(diào)控方式相
4、反;gacA基因突變對(duì)菌群傳感系統(tǒng)屮lux家族基因屮的Iasi表達(dá)量無(wú)顯著影響，但止調(diào)控las系統(tǒng)下游的rhll表達(dá)量,GacA對(duì)phz基因簇表達(dá)的調(diào)控部分通過(guò)菌群傳感系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)?！窘Y(jié)論】在M18菌株和PAO1菌株中,GacA對(duì)吩嗪類(lèi)產(chǎn)物合成的調(diào)控方式相反，對(duì)菌群傳感系統(tǒng)的調(diào)控也存在著羞異性，這些并異可能是兩個(gè)菌株在各
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6、不同生境1摘要假單胞菌株M18(Pseudomonassp.M18)是從上海郊區(qū)甜瓜根際分離篩選到的一株具有生物防治功能的假單胞菌新種，其生防作用部分歸功于其分泌的包括藤黃綠膿
7、菌索(pyoluteorin,Pit)和吩嗪■竣酸(phenazine"-carboxylicacid,PCA)在內(nèi)的多個(gè)抗生物質(zhì)。本研究試圖在分子水平上了解M18菌株中phz合成基因簇的組成及GacA對(duì)M18菌株phz合成基因簇及菌群傳感系統(tǒng)的調(diào)控。木研究?jī)?nèi)容主要包括三個(gè)方面：第一方面，根據(jù)假單胞菌株M18兼有熒光假單胞菌和銅綠假單胞菌的遺傳學(xué)背景，而且假單胞菌株M18與銅綠假單胞菌均可以產(chǎn)生PCA,推測(cè)M18菌株與銅綠假單胞菌具有類(lèi)似的phz合成基因簇。據(jù)此，設(shè)計(jì)保守引物并擴(kuò)增得到M18的p
8、hz合成基因簇，序列分析顯示，假單胞菌株MIX與銅綠假單胞菌株P(guān)AO1(PseudomonasaeruginosaPAO1)中的phz合成基因簇高度相似，備功能基因的同源性均在99%以上。但是，M18菌株phzA2-G2基因簇下游的非編碼區(qū)與PA01菌株不同，存在看三段單位長(zhǎng)度為144bp的重復(fù)序列，說(shuō)明M18菌株與PA01菌株在遺傳上存在著差異。第二方面，運(yùn)用RT-PCR及構(gòu)建phzAJacZ轉(zhuǎn)錄融合，研究了M18菌株屮兩個(gè)phz基因簇的表達(dá)特點(diǎn)以及全局性因子GacA的調(diào)控作用。結(jié)果表明，在野
9、生菌株M18屮,phzAl-Gl的表達(dá)量要明顯高于phzA2-G2,GacA促進(jìn)phzAl-Gl表達(dá)，抑制phzA2-G2表達(dá)，區(qū)別性地調(diào)控兩個(gè)phz基因簇的表達(dá)，但是，GacA在幣體上抑制phz基因簇的表達(dá)，這與PAO1菌株屮，GacA對(duì)phz基因簇的調(diào)控方式相反。第三方面，進(jìn)一步研究了M18菌株屮GacA對(duì)菌群傳感(quorumsensing)系統(tǒng)的調(diào)控作用，表明gacA基因突變對(duì)菌群傳感系統(tǒng)中l(wèi)ux家族基因屮的kisl表達(dá)量無(wú)顯著影響，但正調(diào)控las系統(tǒng)下游的rhll表達(dá)量。結(jié)合木實(shí)驗(yàn)室己
10、有的las及rhl系統(tǒng)對(duì)PCA的調(diào)控形式研究，說(shuō)明GacA對(duì)phz基因簇表達(dá)的調(diào)控主要不通過(guò)las及rhl菌群傳感系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)。在M18菌株和PAO1菌株屮，GacA對(duì)吩嗪類(lèi)產(chǎn)物合成及菌群傳感系統(tǒng)的差異性調(diào)控可能是兩個(gè)菌株在各白不同生境期進(jìn)化的結(jié)果。I假單胞菌株MIX吩嗪合成基因簇表達(dá)調(diào)控及其產(chǎn)物發(fā)酵優(yōu)化研究摘要假單胞菌M18(Pseudomonassp.M18)分離白上海郊區(qū)甜瓜根際，能夠分泌具有廣譜抑菌活性的次生代謝物吩嗪亠竣酸(phenazine亠carboxylicacid,PCA),是一株
