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《生化重點(diǎn)課后題答案.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、3．指出下面pH條件下，各蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中向哪個(gè)方向移動(dòng)，即正極，負(fù)極，還是保持原點(diǎn)？（1）胃蛋白酶（pI1.0），在pH5.0；（2）血清清蛋白（pI4.9），在pH6.0；（3）α-脂蛋白（pI5.8），在pH5.0和pH9.0；解答：（1）胃蛋白酶pI1.0＜環(huán)境pH5.0，帶負(fù)電荷，向正極移動(dòng)；（2）血清清蛋白pI4.9＜環(huán)境pH6.0，帶負(fù)電荷，向正極移動(dòng)；（3）α-脂蛋白pI5.8＞環(huán)境pH5.0，帶正電荷，向負(fù)極移動(dòng)；α-脂蛋白pI5.8＜環(huán)境pH9.0，帶負(fù)電荷，向正極移動(dòng)。13．哪些因素影響Tm值的大?。拷獯穑河绊慣m的因素主要有：①G-C對(duì)含量。G-C對(duì)含3個(gè)
2、氫鍵，A-T對(duì)含2個(gè)氫鍵，故G-C對(duì)相對(duì)含量愈高，Tm亦越高（圖3-29）。在0.15mol/LNaCl,0.015mol/L檸檬酸鈉溶液(1×SSC)中，經(jīng)驗(yàn)公式為：（G+C）%=（Tm-69.3）×2.44。②溶液的離子強(qiáng)度。離子強(qiáng)度較低的介質(zhì)中，Tm較低。在純水中，DNA在室溫下即可變性。分子生物學(xué)研究工作中需核酸變性時(shí)，常采用離子強(qiáng)度較低的溶液。③溶液的pH。高pH下，堿基廣泛去質(zhì)子而喪失形成氫鍵的有力，pH大于11.3時(shí)，DNA完全變性。pH低于5.0時(shí)，DNA易脫嘌呤，對(duì)單鏈DNA進(jìn)行電泳時(shí)，常在凝膠中加入NaOH以維持變性關(guān)態(tài)。④變性劑。甲酰胺、尿素、甲醛等可破壞
3、氫鍵，妨礙堿堆積，使Tm下降。對(duì)單鏈DNA進(jìn)行電泳時(shí)，常使用上述變性劑。16．概述核酸序列測(cè)定的方法和應(yīng)用領(lǐng)域。解答：DNA的序列測(cè)定目前多采用Sanger提出的鏈終止法，和Gilbert提出的化學(xué)法。其中鏈終止法經(jīng)不斷改進(jìn)，使用日益廣泛。鏈終止法測(cè)序的技術(shù)基礎(chǔ)主要有：①用凝膠電泳分離DNA單鏈片段時(shí)，小片段移動(dòng)，大片段移動(dòng)慢，用適當(dāng)?shù)姆椒煞蛛x分子大小僅差一個(gè)核苷酸的DNA片段。②用合適的聚合酶可以在試管內(nèi)合成單鏈DNA模板的互補(bǔ)鏈。反應(yīng)體系中除單鏈模板外，還應(yīng)包括合適的引物，4種脫氧核苷三磷酸和若干種適量的無機(jī)離子。如果在4個(gè)試管中分別進(jìn)行合成反應(yīng)，每個(gè)試管的反應(yīng)體系能在一
4、種核苷酸處隨機(jī)中斷鏈的合成，就可以得到4套分子大小不等的片段，如新合成的片段序列為-CCATCGTTGA-，在A處隨機(jī)中斷鏈的合成，可得到-CCA和-CCATCGTA兩種片段，在G處中斷合成可得到-CCATCG和-CCATCGTTG兩種片段。在C和T處中斷又可以得到相應(yīng)的2套片段。用同位素或熒光物質(zhì)標(biāo)記這4套新合成的鏈，在凝膠中置于4個(gè)泳道中電泳，檢測(cè)這4套片段的位置，即可直接讀出核苷酸的序列。在特定堿基處中斷新鏈合成最有效的辦法，是在上述4個(gè)試管中按一定比例分別加入一種相應(yīng)的2
