資源描述:
《固定化技術(shù)在殼聚糖酶生產(chǎn)中應(yīng)用》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、固定化技術(shù)在殼聚糖酶生產(chǎn)中應(yīng)用 摘要:以產(chǎn)酶活性與產(chǎn)酶穩(wěn)定性為指標(biāo)評價3種固定化細胞產(chǎn)殼聚糖酶(Chitosanase,EC3.2.1.99)方法,以酶比活力、酶結(jié)合效率、酶活力回收率及穩(wěn)定性評價4種固定化殼聚糖酶方法,以篩選最優(yōu)固定化方案應(yīng)用于殼聚糖酶的生產(chǎn)。結(jié)果表明,海藻酸鈉殼聚糖包埋法固定化細胞的產(chǎn)殼聚糖酶活性較高且穩(wěn)定性好;海藻酸鈉殼聚糖吸附包埋固定化殼聚糖酶的酶比活力、酶結(jié)合效率與酶活力回收率均為最高,且穩(wěn)定性強。關(guān)鍵詞:固定化技術(shù);殼聚糖;殼聚糖酶(Chitosanase,EC3.2.1.99);海藻酸鈉中圖分類號:Q556+.2文獻標(biāo)識碼:A文章編號:04
2、39-8114(2013)21-5282-03ApplicationofImmobilizationTechniqueinProducingChitosanaseYUANJian-ping,HOUXiao-qiang(CollegeofLifeScience,LangfangNormalUniversity,Langfang065000,Hebei,China)Abstract:Chitosanaseproductionwasoptimizedthroughevaluatingthreemethodsofcellsimmobilizationusingtheactivit
3、yandstabilityof9enzymeproductionasindicators.Fourmethodsofenzymeimmobilizationwereevaluatedusingoftheenzymecombinationefficiency,enzymeactivityrecoveryandenzymestabilityasindicators.Theresultsshowedthatthesodiumalginateandchitosanembedmethodwastheoptimalmethodofcellsandenzymeimmobilizatio
4、nduetoitsbestperformanceintheactivityandstabilityofenzymeproductionandintheenzymeactivity,enzymecombinationefficiency,enzymeactivityrecoveryandenzymestability.Keywords:immobilizationtechnique;chitosan;chitosanase(EC3.2.1.99);sodiumalginate殼聚糖酶(Chitosanase,EC3.2.1.99)是一種高效、專一水解殼聚糖制備殼寡糖的酶[1
5、,2]。近年來,利用專一性殼聚糖酶水解殼聚糖制取殼寡糖已成為甲殼素工業(yè)的研究熱點與前沿[3,4]。目前殼聚糖酶研究多集中于菌種篩選與游離細胞產(chǎn)酶條件等方面。固定化細胞與固定化酶技術(shù)對于提高酶的生產(chǎn)與應(yīng)用效率有重要意義[5,6]。本試驗采用多種方法對產(chǎn)殼聚糖酶菌種及殼聚糖酶固定化進行研究,旨在篩選最適固定化細胞及固定化酶的方法。1材料與方法91.1藥品與試劑殼聚糖(脫乙酰度≥80%,濟南海得貝海洋生物工程公司),海藻酸鈉(黏度范圍:1.05~1.15,天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心),乙酸、NaOH、甲醇、戊二醛、HCl、NaCl、CaCl2等試劑均為國產(chǎn)分析純。1.2菌種與培
6、養(yǎng)基產(chǎn)殼聚糖酶菌株Yg,廊坊師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院微生物實驗室保存提供。改良PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯(去皮)200g,葡萄糖30g,蛋白胨2g,KH2PO40.5g,(NH4)2SO40.5g,維生素B110mg,蒸餾水1000mL,115℃高壓滅菌30min[7]。產(chǎn)酶培養(yǎng)基:KCl5g,NaCl5g,MgSO4·7H2O5g,K2HPO40.75g,F(xiàn)eSO40.01g,蛋白胨8.5g,牛肉膏0.25g,殼聚糖10g,蒸餾水1000mL,pH7.5~8.0,121℃高壓滅菌30min[8]。1.3方法1.3.1固定化細胞產(chǎn)殼聚糖酶將Yg菌株于改良PDA斜面上活化2次,而后接
7、種于改良PDA液體培養(yǎng)基,36℃、180r/min培養(yǎng)16h,再用0.75%無菌生理鹽水5000r/min離心洗滌2次,每次20min,取菌體沉淀4℃保藏備用。采用3種方法對細胞進行固定化處理:①海藻酸鈉包埋法。取2.5%海藻酸鈉溶液50mL,加入2g濕菌體,攪拌混勻,用8號針頭從離液面10cm高處將其滴入2%9CaCl2溶液中,濾出凝膠小球,重新置于2%CaCl2溶液中,4℃靜置硬化2h[9]。②海藻酸鈉殼聚糖包埋法。2.5%海藻酸鈉溶液中加入1%的殼聚糖,配制海藻酸鈉殼聚糖膠體溶液。取該溶液50mL,加入2g濕菌體,攪拌混