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《《生化反應(yīng)曲線》PPT課件.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、生化反應(yīng)曲線生化分析基本原理生化反應(yīng)曲線內(nèi)容概況羅氏生化分析系統(tǒng)產(chǎn)品線Cobas6000(c501)600T/HModularD2400T/HModularP800T/HCobasc311300T/HCobasc111180T/HCobas80002000T/Hcobas?8000模塊化組合分析系統(tǒng)智能、高效、強(qiáng)勁物質(zhì)對(duì)光吸收的基本定律－Lambert-Beer定律Lambert－Beer定律表達(dá)為:當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)含有均勻吸光物質(zhì)的溶液時(shí),溶液的吸光度(A)與溶液的濃度(C)和光透過(guò)液層厚度(L)
2、的乘積成正比。物質(zhì)對(duì)光吸收的吸光系數(shù)（e）為常數(shù)?！钇鋽?shù)學(xué)表達(dá)式：A=e*C*LI入射光透射光I0==-------光吸收的基本定律=lightdetector根據(jù)Lambert-Beer定律來(lái)計(jì)算待測(cè)物濃度如若吸光系數(shù)(ε)未知，我們就需要采用定標(biāo)曲線來(lái)計(jì)算待測(cè)物的濃度。濃度(amountofsubstance)吸光度(amountofcolor)40123456706050302010Calibrator/standard標(biāo)準(zhǔn)品(cfas)待測(cè)樣本Concx=ΔAbsxxConcsAbssConcx=
3、待測(cè)樣本濃度Concs=標(biāo)準(zhǔn)品濃度ΔAbsx=樣本吸光度Abss=標(biāo)準(zhǔn)品吸光度此值為定值Lambert-Beer定律適合于任何均勻非散射的介質(zhì)生化比色分析特定蛋白透射比濁分析Lambert-Beer定律分光光度法定量分析的依據(jù)RocheHitachiPhotometer當(dāng)相應(yīng)的比色杯每一次通過(guò)光路系統(tǒng)時(shí)，光路系統(tǒng)會(huì)測(cè)量并記錄下相應(yīng)的吸光度光路系統(tǒng)可以測(cè)量后分光后12個(gè)波長(zhǎng)的相應(yīng)吸光度。12有效波長(zhǎng):340,376,415,450,480,505,546,570,600,660,700,800nm多數(shù)檢測(cè)項(xiàng)
4、目都使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)方法。（可去除干擾物對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響）Reactionsequence儀器讀數(shù)的原理不同儀器每個(gè)循環(huán)周期的時(shí)間間隔ModularP18秒Cobasc70216秒CobasC5018秒ModularD12秒C31112秒反應(yīng)轉(zhuǎn)盤(pán)不停的周期旋轉(zhuǎn)當(dāng)相應(yīng)的比色杯通過(guò)光路系統(tǒng)時(shí)，光路系統(tǒng)會(huì)測(cè)量并記錄下相應(yīng)的吸光度在不同的時(shí)間點(diǎn)加入相應(yīng)的反應(yīng)試劑ReactionsequenceInstrumentcycleEndpointandrate(kinetic)assays自動(dòng)生化分析常用的方法有:終點(diǎn)法（
5、EndPointAssays）：一般在整個(gè)反應(yīng)完成后再來(lái)檢測(cè)吸光度速率法（Rateassays）：一般在反應(yīng)的過(guò)程中監(jiān)測(cè)吸光度的變化情況終點(diǎn)分析法時(shí)間吸光度A1tS+R1基于被測(cè)物質(zhì)在反應(yīng)過(guò)程中到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)或平衡點(diǎn)，根據(jù)該點(diǎn)吸光度的大小求出被測(cè)物濃度，稱為終點(diǎn)法。終點(diǎn)法的計(jì)算：從時(shí)間-吸光度曲線來(lái)看，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)時(shí)，吸光度將不再變化。在達(dá)到終點(diǎn)時(shí)任取一點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，此時(shí)底物和產(chǎn)物的量都不再變化。吸光度A1S+R1吸光度兩點(diǎn)終點(diǎn)法（2-pointend）一點(diǎn)終點(diǎn)法（1-pointend）一點(diǎn)終點(diǎn)單試劑（1-p
6、ointendpointassay–onereagent）一點(diǎn)終點(diǎn)雙試劑（1-pointendpointassay–tworeagents）三點(diǎn)終點(diǎn)法（3-pointend）終點(diǎn)分析法（Endpointassays）兩點(diǎn)終點(diǎn)法在被測(cè)物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開(kāi)始時(shí)，選擇第一個(gè)吸光度，在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)或平衡時(shí)選擇第二個(gè)吸光度，此兩點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算結(jié)果。去除了樣本的本底采用兩個(gè)測(cè)量點(diǎn)針對(duì)兩個(gè)或多個(gè)試劑的項(xiàng)目第一個(gè)讀數(shù)點(diǎn)一般選在添加最后一個(gè)試劑之前第二個(gè)讀數(shù)點(diǎn)一般選在加入最后一個(gè)試劑之后且已經(jīng)達(dá)到了反應(yīng)終點(diǎn)兩點(diǎn)終點(diǎn)
7、法的特點(diǎn)C+D(顯色產(chǎn)物)+B1(試劑1)+B2(試劑2)A(樣本)Endpointassays兩點(diǎn)終點(diǎn)法的反應(yīng)曲線–Cobasc702EndpointassaysSample+R1Mp1absbeforeadditionofR3Mp2absatreactionend兩點(diǎn)讀數(shù)的時(shí)間點(diǎn):第19點(diǎn)測(cè)量包含了樣本和試劑1的本底?sample+reagent1第38點(diǎn)在加入所有試劑后，反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)?sample+reagent1+reagent2兩點(diǎn)終點(diǎn)法的應(yīng)用參數(shù)–Cobasc702測(cè)量的兩個(gè)讀數(shù)點(diǎn)方法類型總反
8、應(yīng)時(shí)間（min）2PointEndpointassayapplicationsettingsRF-IIC4C3ASLCRPLIGGIGAIGM兩點(diǎn)終點(diǎn)法分析項(xiàng)目舉例Endpointassays一點(diǎn)終點(diǎn)法A單試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法例如:CHOL/TG….在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)，即在時(shí)間-吸光度曲線上吸光度不再改變時(shí)選擇一個(gè)終點(diǎn)吸光度值，用于計(jì)算結(jié)果。B雙試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法Mg(雙試劑)…單試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法的特點(diǎn)（1-pointendpointassa
