《生化反應曲線》PPT課件.ppt

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1、生化反應曲線生化分析基本原理生化反應曲線內容概況羅氏生化分析系統(tǒng)產品線Cobas6000(c501)600T/HModularD2400T/HModularP800T/HCobasc311300T/HCobasc111180T/HCobas80002000T/Hcobas?8000模塊化組合分析系統(tǒng)智能、高效、強勁物質對光吸收的基本定律－Lambert-Beer定律Lambert－Beer定律表達為:當一束平行的單色光通過含有均勻吸光物質的溶液時,溶液的吸光度(A)與溶液的濃度(C)和光透過液層厚度(L)

2、的乘積成正比。物質對光吸收的吸光系數（e）為常數?！钇鋽祵W表達式：A=e*C*LI入射光透射光I0==-------光吸收的基本定律=lightdetector根據Lambert-Beer定律來計算待測物濃度如若吸光系數(ε)未知，我們就需要采用定標曲線來計算待測物的濃度。濃度(amountofsubstance)吸光度(amountofcolor)40123456706050302010Calibrator/standard標準品(cfas)待測樣本Concx=ΔAbsxxConcsAbssConcx=

3、待測樣本濃度Concs=標準品濃度ΔAbsx=樣本吸光度Abss=標準品吸光度此值為定值Lambert-Beer定律適合于任何均勻非散射的介質生化比色分析特定蛋白透射比濁分析Lambert-Beer定律分光光度法定量分析的依據RocheHitachiPhotometer當相應的比色杯每一次通過光路系統(tǒng)時，光路系統(tǒng)會測量并記錄下相應的吸光度光路系統(tǒng)可以測量后分光后12個波長的相應吸光度。12有效波長:340,376,415,450,480,505,546,570,600,660,700,800nm多數檢測項

4、目都使用雙波長檢測方法。（可去除干擾物對檢測結果的影響）Reactionsequence儀器讀數的原理不同儀器每個循環(huán)周期的時間間隔ModularP18秒Cobasc70216秒CobasC5018秒ModularD12秒C31112秒反應轉盤不停的周期旋轉當相應的比色杯通過光路系統(tǒng)時，光路系統(tǒng)會測量并記錄下相應的吸光度在不同的時間點加入相應的反應試劑ReactionsequenceInstrumentcycleEndpointandrate(kinetic)assays自動生化分析常用的方法有:終點法（

5、EndPointAssays）：一般在整個反應完成后再來檢測吸光度速率法（Rateassays）：一般在反應的過程中監(jiān)測吸光度的變化情況終點分析法時間吸光度A1tS+R1基于被測物質在反應過程中到達反應終點或平衡點，根據該點吸光度的大小求出被測物濃度，稱為終點法。終點法的計算：從時間-吸光度曲線來看，到達反應終點時，吸光度將不再變化。在達到終點時任取一點進行測定，此時底物和產物的量都不再變化。吸光度A1S+R1吸光度兩點終點法（2-pointend）一點終點法（1-pointend）一點終點單試劑（1-p

6、ointendpointassay–onereagent）一點終點雙試劑（1-pointendpointassay–tworeagents）三點終點法（3-pointend）終點分析法（Endpointassays）兩點終點法在被測物反應或指示反應尚未開始時，選擇第一個吸光度，在反應到達終點或平衡時選擇第二個吸光度，此兩點吸光度之差用于計算結果。去除了樣本的本底采用兩個測量點針對兩個或多個試劑的項目第一個讀數點一般選在添加最后一個試劑之前第二個讀數點一般選在加入最后一個試劑之后且已經達到了反應終點兩點終點

7、法的特點C+D(顯色產物)+B1(試劑1)+B2(試劑2)A(樣本)Endpointassays兩點終點法的反應曲線–Cobasc702EndpointassaysSample+R1Mp1absbeforeadditionofR3Mp2absatreactionend兩點讀數的時間點:第19點測量包含了樣本和試劑1的本底?sample+reagent1第38點在加入所有試劑后，反應達到終點?sample+reagent1+reagent2兩點終點法的應用參數–Cobasc702測量的兩個讀數點方法類型總反

8、應時間（min）2PointEndpointassayapplicationsettingsRF-IIC4C3ASLCRPLIGGIGAIGM兩點終點法分析項目舉例Endpointassays一點終點法A單試劑一點終點法例如:CHOL/TG….在反應到達終點，即在時間-吸光度曲線上吸光度不再改變時選擇一個終點吸光度值，用于計算結果。B雙試劑一點終點法Mg(雙試劑)…單試劑一點終點法的特點（1-pointendpointassa