蘆丁對衰老小鼠大腦皮質(zhì)和海馬nos活性的影響

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1、蘆丁對衰老小鼠大腦皮質(zhì)和海馬NOS活性的影響　　【摘要】目的探討蘆?。≧utin）的抗衰老作用及其可能機(jī)制。方法選用健康的昆明小鼠60只，隨機(jī)分為對照組、衰老組、陽性對照組、低劑量蘆丁組和高劑量蘆丁組。除對照組外，其他組小鼠通過注射D半乳糖制成亞急性衰老模型。選用陽性對照藥物和兩種劑量(20mg/kg，40mg/kg)蘆丁對亞急性衰老模型小鼠治療6w。通過Y迷宮行為測試，光鏡NADPHd組織化學(xué)法觀察實(shí)驗(yàn)小鼠的學(xué)習(xí)行為變化及大腦皮質(zhì)和海馬結(jié)構(gòu)NOS神經(jīng)元的形態(tài)和數(shù)目。結(jié)果衰老組小鼠Y迷宮學(xué)習(xí)次數(shù)明顯多于其他組(P＜005)，高劑量蘆丁組小鼠Y迷宮學(xué)習(xí)次

2、數(shù)明顯少于陽性對照組(P＜005)；兩種劑量蘆丁組皮質(zhì)和海馬結(jié)構(gòu)NOS神經(jīng)元數(shù)目較衰老組均增多(P＜005)，高劑量蘆丁組海馬CA1區(qū)和齒狀回的NOS神經(jīng)元數(shù)目較陽性對照組顯著增多（P＜005)。結(jié)論蘆丁對衰老小鼠皮質(zhì)和海馬結(jié)構(gòu)NOS活性有保護(hù)作用。【關(guān)鍵詞】蘆丁一氧化氮合酶D半乳糖小鼠蘆丁是黃酮類化合物之一，廣泛存在于天然植物中，具有抗脂質(zhì)過氧化〔1，2〕的作用，給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂食蘆丁、VitE等能夠延長其壽命〔3〕，還能抑制血小板活化，增強(qiáng)血管抵抗力〔4，5〕，對心、腎、腦等器官的缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用〔6～9〕。臨床上蘆丁主要用于防治腦出血、高

3、血壓、視網(wǎng)膜出血、紫癜、急性出血性腎炎、治療慢性氣管炎和糖尿病腎病〔10〕等方面。此外，由于衰老過程與脂質(zhì)過氧化、自由基等因素密切相關(guān)，而蘆丁又具有良好的抗脂質(zhì)過氧化作用，因此蘆丁也具有抗衰老的作用〔11〕，但是蘆丁能否延緩腦衰老尚待驗(yàn)證。本研究采用亞急性衰老模型小鼠進(jìn)行蘆丁延緩腦衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究?！　?材料與方法　　11動(dòng)物選用健康的昆明小鼠60只，隨機(jī)分為5組，即對照組、衰老組、陽性對照組、低劑量蘆丁給藥組、高劑量蘆丁給藥組。　　12方法　　121試劑與儀器Y型小鼠迷宮(張家港生物醫(yī)學(xué)儀器廠)；多聚甲醛(上海溶劑廠)；NADPHd反應(yīng)液(Si

4、gma)：蘆丁(成都超人植化開發(fā)有限公司提供)；恒冷箱切片機(jī)(SAKURACM501)；倒置顯微鏡(NikonE800EFUV)?！　?22模型的建立用D半乳糖（Dgal120mg/kg)對實(shí)驗(yàn)小鼠皮下注射6周，建立衰老模型，Y迷宮實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證?！　?23給藥方法對照組皮下注射生理鹽水0.5ml/(d·只)，生理鹽水灌胃05ml/(d·只)；衰老組：皮下注射Dgal05ml/(d·只)，灌胃生理鹽水05ml/(d·只)；陽性對照組：皮下注射Dgal05ml/(d·只)，腦復(fù)康液灌胃05ml/(d·只)（30mg/kg）；低劑量蘆丁給藥

5、組：皮下注射Dgal05ml/(d·只)，蘆丁液灌胃05ml/(d·只)（20mg/kg）；高劑量蘆丁給藥組：皮下注射Dgal05ml/(d·只)，蘆丁液灌胃05ml/(d·只)（40mg/kg）。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按上述方法處理6w，普飼普水喂養(yǎng)?！　?24行為學(xué)測試采用Y迷宮實(shí)驗(yàn)，迷宮分為三臂。實(shí)驗(yàn)時(shí)兩臂有光刺激無電刺激，一臂有電刺激無光刺激三臂連接處始終有電。將動(dòng)物放入迷宮的有光、無電一臂適應(yīng)60s，切換光源，待動(dòng)物進(jìn)入有光無電處后開始記時(shí)，30s時(shí)切換光源，如此進(jìn)行切換20次。每次切換光源記作學(xué)習(xí)1次，每天每只動(dòng)物學(xué)習(xí)20次，第20次切換后

6、待動(dòng)物進(jìn)入有光無電處后適應(yīng)30s將動(dòng)物取出。每只動(dòng)物連續(xù)9次從無光有電處直接進(jìn)入有光無電處為學(xué)會，第1天學(xué)不會者第2天繼續(xù)學(xué)習(xí)，直至學(xué)會。將學(xué)會次數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析?！　?25樣品制備各組小鼠在相同條件下麻醉，開胸，快速經(jīng)心臟灌注生理鹽水100ml，再用300ml含4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液灌注固定。取右側(cè)腦入上述固定液后固定6h(4℃)，再移入含20%蔗糖的磷酸鹽緩沖液中至腦沉底(4℃)。冰凍切片機(jī)冠狀位切片，片厚30μm。　　126皮質(zhì)和海馬CA1、CA3、齒狀回NOS活性采用NADPH－d組化染色，間接顯示NOS在皮質(zhì)和海馬的分布，以此確定NOS活

7、性及NO的合成能力。切片移入NADPHd反應(yīng)液，37℃孵育1h，終止反應(yīng)后裱片、脫水、透明、封片。每組選取對應(yīng)斷面的皮層和海馬腦片各10張，光鏡下分別對皮層及海馬結(jié)構(gòu)CA1區(qū)、CA3區(qū)和齒狀回內(nèi)所有NOS陽性神經(jīng)元計(jì)數(shù)?！　?3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因素方差分析（onewayANOVA）及兩兩比較的q檢驗(yàn)，SPSS110統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)?！　?結(jié)果　　21Y迷宮實(shí)驗(yàn)與衰老組小鼠迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)會次數(shù)相比，其他各組的迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)會次數(shù)明顯減少(P＜005)；與陽性對照組比較，高劑量蘆丁給藥組的迷宮學(xué)會次數(shù)明顯減少（P＜005）（表1）?！　?2皮質(zhì)和

8、海馬結(jié)構(gòu)各區(qū)NADPHd陽性神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)目的變化