IVM對鯽魚影響研究.doc

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1、IVM對鯽魚影響研究本文伊維菌素(Ivermectin，IVM)為阿維菌素的衍生物，是由鏈霉菌產(chǎn)生的一種大環(huán)內(nèi)酯類物質(zhì)，具有用量小、效果好、安全性高等特點，在農(nóng)牧業(yè)中常作為抗寄生蟲劑和殺蜻劑使用。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模和密度的不斷擴大，一些寄生蟲病如鲺病、車輪蟲病、指環(huán)蟲病和異尖線蟲病等給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成的損失與日劇增，甚至可能危害人類健康［1］。作為一種新型、高效的魚類抗寄生蟲藥劑伊維菌素在國外水產(chǎn)養(yǎng)殖中已有一定范圍的使用。歐洲許多國家如蘇格蘭、愛爾蘭等將其添加到飼料中，用于鮭魚和海鯛養(yǎng)殖中的海虱防治［2－3］。我國主要將其應(yīng)用于淡水魚養(yǎng)殖中的斜

2、管蟲、車輪蟲病防治［4－5］。目前，有幾篇文獻報道了IVM對哺乳動物的毒性作用，如Lankas等［6］實驗表明IVM不具遺傳毒性和潛在致癌性;Abeer等［7］實驗結(jié)果顯示，當(dāng)與P－糖蛋白抑制劑聯(lián)合使用時，IVM會影響雄鼠的生殖系統(tǒng);Muhamad等［8］研究發(fā)現(xiàn)，IVM還會一定程度上影響動物的免疫力。IVM現(xiàn)在作為漁藥使用范圍越來越廣泛，因此除了要關(guān)注它的環(huán)境毒性外，研究它對養(yǎng)殖魚自身的毒性作用也是很有必要的，硬骨魚類的血腦屏障發(fā)育不完善，因此IVM較易到達魚的頭部，但目前關(guān)于IVM在魚體內(nèi)的毒理學(xué)方面研究甚少。魚類的血液指標(biāo)與許多因素有

3、關(guān)，如機體的年齡、營養(yǎng)代謝狀況、健康狀況等。當(dāng)魚體受到外界因子的影響而發(fā)生生理或病理變化時，必定會在血液指標(biāo)中反映出來，因此血液指標(biāo)常被用來評價魚類的營養(yǎng)、健康狀況及對環(huán)境的適應(yīng)性，是重要的生理、病理和毒理學(xué)指標(biāo)［9］。本實驗以不同給藥劑量研究了IVM對鯽(Carassiusauratus)血液成分的影響，以期評價IVM對鯽的毒性效應(yīng)，為IVM的科學(xué)使用和管理提供一定的依據(jù)。1材料與方法1.1實驗動物鯽購自上海果園集貿(mào)市場，健康無傷病，平均體重(250±20)g。實驗前在循環(huán)水養(yǎng)殖箱(250cm×150cm×70cm)中暫養(yǎng)30d，水溫控制

4、在(25±1)℃，增氧機充氧，投喂全價魚飼料(浙江恒興飼料有限公司)，暫養(yǎng)期間死亡率低于5%。4學(xué)海無涯1.2儀器與試劑實驗所用儀器:純水機(Milli－Q)、電子天平(FA2004)、超低溫冰箱(ThermoForma－700)、全血分析儀(BC－2800Vet)和生化分析儀(BS－200)等。所用藥品:IVM標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma公司)、無水乙醇和肝素鈉均為分析純(國藥公司)、Milli－Q超純水、總蛋白(TP)測定試劑盒(雙縮脲法)、白蛋白(ALB)測定試劑盒(溴甲酚綠法)、總膽紅素(Tbil)測定試劑盒(Tb－D:重氮法)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)

5、移酶(ALT)測定試劑盒(紫外－乳酸脫氫酶法)、堿性磷酸酶(ALP)測定試劑盒(AMP緩沖液法)和鈣測定試劑盒(Ca－O鄰甲酚酞絡(luò)合酮終點法)，上述試劑盒均購自邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。1.3給藥與采樣將實驗用鯽隨機分成A、B、C、D、E五組，每組27尾。A、B、C三組口灌給藥，給藥劑量分別為3.0、1.0、0.4mg/kg，以無水乙醇為溶劑;D組口灌與前三組等體積的無水乙醇作對照，每條鯽魚灌入的無水乙醇的量小于0.3mL;E組不做任何處理。給藥前6h禁食，給藥后6h投餌。分別在給藥后1、2、4、8、16、24、48、96、192h取樣

6、，每個時間點每組均取3尾魚，抽取鯽血液后分成兩份，置于含少量1%肝素鈉(已風(fēng)干)離心管中。一份立即進行全血分析，另一份經(jīng)離心5min后分離血漿(離心力2000g)，于－80℃保存用于血液的生化分析。1.4血樣分析鯽經(jīng)靜脈采血后立即進全血分析儀進行分析。用于生化組分分析的血漿從－80℃冰箱中取出后，在0℃的條件下解凍，將解凍后的血漿搖勻后進生化分析儀分析。2結(jié)果2.1IVM對鯽血細(xì)胞的影響4學(xué)海無涯口灌IVM對鯽血液中紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、血紅蛋白(HGB)等指標(biāo)的影響結(jié)果見表1。組間單因

7、素方差分析可知，實驗組鯽RBC、WBC、HGB、HCT與對照組間均無顯著性差異，而PLT則與對照組存在組間顯著性差異(P=0.043＜0.05)。雙樣本等方差t－檢驗顯示:D組和E組間無顯著性差異，D組和A、B、C組間均存在顯著性差異(P值分別為0.02、0.016和0.007，均小于0.05)，表明口灌IVM對鯽PLT數(shù)量有顯著影響。圖1顯示，不同采樣時間，給藥組鯽的PLT數(shù)量波動較大:給藥后8～16hPLT數(shù)量快速增加，16～24h數(shù)量相對穩(wěn)定，24h后PLT的數(shù)量開始下降，至192hPLT值逐漸恢復(fù)到對照組水平。A(3mg/kg)組給

8、藥16h后開始出現(xiàn)死魚，解剖后可見腎臟有出血跡象，這與Mladineo等［10］觀察到的IVM使海鯛腎臟點狀出血現(xiàn)象一致。本實驗還發(fā)現(xiàn)A(3mg/kg)、B(1mg/kg)組鯽食