眼針療法干預(yù)mcao模型大鼠抗氧化機(jī)制探究

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1、眼針療法干預(yù)MCAO模型大鼠抗氧化機(jī)制探究　　隨著人口老齡化的加重，中風(fēng)病發(fā)病率也隨之提高，嚴(yán)重威脅著人類健康，探索中風(fēng)病發(fā)病機(jī)制及有效防治方法成為醫(yī)療工作者的首要任務(wù)。眼針是以祖國醫(yī)學(xué)臟腑經(jīng)絡(luò)理論為基礎(chǔ)，根據(jù)眼球結(jié)膜上血管的形色變化，判斷性質(zhì)和部位，然后辨證針刺眼周特定穴位以治療全身疾病。根據(jù)后天八卦將眼周分為八個(gè)區(qū)，再與五臟六腑聯(lián)系起來，治療急性缺血性中風(fēng)時(shí)選取肝區(qū)、腎區(qū)、上焦區(qū)、下焦區(qū)以滋腎陰，清肝火，輸通上下焦氣機(jī)，活血通絡(luò)，使病得愈。眼針對(duì)于缺血性中風(fēng)的療效已為眾人所承認(rèn)，但其作用機(jī)制尚不清楚，本研究擬采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方式，探索眼針對(duì)缺血性腦病的抗

2、氧化作用機(jī)制。1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠60只，購自中國醫(yī)科大學(xué)，許可證號(hào)：SCXK（遼）2008-0005。大鼠購入后適應(yīng)性飼養(yǎng)1w，1w后用于正式試驗(yàn)。大鼠飼養(yǎng)于通風(fēng)干燥的環(huán)境中，室溫（18±2）℃，相對(duì)濕度45%。常規(guī)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水，12h晝夜節(jié)律，更換1次/d墊料，以保證大鼠生存環(huán)境潔凈。4大鼠體重均勻，均在（300±30）g范圍，毛色純白，富有光澤，活動(dòng)度適中，晚間活動(dòng)度增加，步態(tài)正常，行為學(xué)觀察未見異常大鼠。1.2儀器設(shè)備恒溫水浴振蕩器，SHA-B型，常州國華儀器設(shè)備廠生產(chǎn)。電子天平，JY5002型，0.01g～500g，

3、上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。電子天平，BS223S型，0.001g～220g，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有統(tǒng)公司生產(chǎn)。微量移液器，美國熱電公司生產(chǎn)。紫外分光光度計(jì)，T6新世紀(jì)型，北京普析通用儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)。1.3實(shí)驗(yàn)試劑及耗材MDA、SOD和GSH-PX測(cè)試盒購自南京建成生物研究所。針灸針購自成大方圓連鎖藥店（陵東分店）。凍存管、吸頭、PCR管等耗材均購自沈陽博爾美生物有限公司。2實(shí)驗(yàn)方法2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的復(fù)制2.1.1腦缺血再灌注大鼠模型的復(fù)制參考馬賢德[1]等人發(fā)表的”線栓法制備大鼠腦缺血再灌注模型的方法研究”一文復(fù)制腦缺血再灌注大鼠模型。模型復(fù)制

4、成功后，栓塞2h后，拔除栓塞線，進(jìn)行再灌注，再灌注時(shí)間為72h。2.1.2假手術(shù)組動(dòng)物模型復(fù)制假手術(shù)組手術(shù)方式同模型組，但不做栓塞，僅暴露出右側(cè)頸總動(dòng)脈（CCA）、頸外動(dòng)脈（ECA）、頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA），然后逐層縫合即可。2.2模型評(píng)價(jià)4神經(jīng)功能缺損評(píng)分：參考Longa及Bederson的5分制法在動(dòng)物麻醉完全清醒后進(jìn)行評(píng)分[2]。0分：沒有神經(jīng)損傷；1分：對(duì)側(cè)前爪不能自由伸展；2分：向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)；3分：向?qū)?cè)翻到；4分：行走不自由，意識(shí)模糊。分值越高，說明動(dòng)物所表現(xiàn)出的問題就越多。選取評(píng)分在1～3分的動(dòng)物模型進(jìn)行試驗(yàn)。2.3實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)因素施加2.3.1

5、實(shí)驗(yàn)分組SPF級(jí)SD大白鼠60只，隨機(jī)分為四組：空白對(duì)照組（10只），假手術(shù)組（10只），MCAO模型對(duì)照組（20只），眼針治療組（20只）。2.3.2各組干預(yù)因素施加空白對(duì)照組，常規(guī)飼養(yǎng)，不施加任何干預(yù)。假手術(shù)組，采用2.1.2中所述方法，復(fù)制假手術(shù)模型，模型復(fù)制后正常飼養(yǎng)，不做任何處理，模型復(fù)制后72h進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。MCAO模型對(duì)照組，采用2.1.1中所述方法，復(fù)制腦缺血再灌注模型，模型復(fù)制后，正常飼養(yǎng)，不做任何處理，于再灌注72h進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。眼針治療組，采用2.1.1中所述方法，進(jìn)行MCAO模型復(fù)制，再灌注即刻開始進(jìn)行針刺治療，2次/d，連

6、續(xù)3d。于再灌注72h進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。2.3.3眼針取穴及刺法4取13mm毫針，眼針組選定大鼠眶周2mm處進(jìn)行針刺，選擇的位置比對(duì)人體取穴措施[3，4]，選取肝區(qū)、上焦區(qū)、下焦區(qū)、腎區(qū)，見圖1。采用針刺的手段：從眼眶邊緣2mm部位進(jìn)行平刺，左眼從順時(shí)針方向（右側(cè)按逆時(shí)針方向），從該穴區(qū)起始定位線向終止定位線進(jìn)針，進(jìn)行平刺操作，刺入真皮，達(dá)到皮下組織，進(jìn)針3mm，到終止定位線為止。留針20min，留針10min時(shí)用刮柄進(jìn)行刮針1次，刮針5下。圖1眼針定位示意圖2.4指標(biāo)檢測(cè)2.4.1死亡率和神經(jīng)功能缺損評(píng)分觀測(cè)各組大鼠模型復(fù)制成功后，進(jìn)行再灌注前參考”神經(jīng)

7、功能缺損評(píng)分”標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，以評(píng)價(jià)模型復(fù)制成功情況。末次針灸后，清點(diǎn)各組大鼠數(shù)量，計(jì)算總死亡率，并對(duì)各組大鼠再次進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，統(tǒng)計(jì)分析組間差異。2.4.2各組大鼠血清中MDA、SOD和GSH-PX含量測(cè)定各組大鼠末次針灸后，以10%水合氯醛（3.5ml/kg體重）腹腔麻醉，剖開腹部，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，靜置1h后，2000轉(zhuǎn)/min，離心10min，分離血清備用。采用比色法對(duì)各組大鼠血清中MDA、SOD、GSH-PX的含量進(jìn)行測(cè)定。2.5統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用”x±s“表示，組間比較采用單因素方差分析，P　　3.

8、2各組大鼠血清MDA、SOD和GSH-PX含量各組大鼠血清中MDA