水產(chǎn)動(dòng)物疾病診斷技術(shù)

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1、現(xiàn)代生物技術(shù)在水產(chǎn)動(dòng)物疾病診斷上的應(yīng)用生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖06-4班安海燕0601101401隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，集約化程度的不斷提高，一方面推動(dòng)了養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)，增加了經(jīng)濟(jì)效益；另一方面也帶來一個(gè)不容忽視的問題－疾病滋生，有嚴(yán)重困擾著養(yǎng)殖業(yè)的步伐。如何尋求一種有效的途徑來緩解疾病給養(yǎng)殖業(yè)帶來的危害與損失，一直是人們所關(guān)注的主題。近些年來，生物技術(shù)的蓬勃發(fā)展，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來了新的挈機(jī)。國內(nèi)外諸多學(xué)者將這一新興科技用于病害防治，取得了不少成果，并顯示出良好的發(fā)展前景。水產(chǎn)動(dòng)物疾病診斷技術(shù)的發(fā)展與相應(yīng)的病原研究的深入程度密切相關(guān)，近20年來，用現(xiàn)代

2、生物學(xué)技術(shù)檢測病毒、細(xì)菌性病害的發(fā)展迅速，主要有熒光抗體技術(shù)、免疫酶技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、核酸雜交技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)等。由于上述檢測技術(shù)的靈敏度高、特異性強(qiáng)、實(shí)用性好等特點(diǎn)，在國內(nèi)外已成為多種水產(chǎn)動(dòng)物病毒、細(xì)菌等病害的常規(guī)診斷方法。對(duì)鮭鱒魚、對(duì)蝦等的主要病毒和細(xì)菌病原的相應(yīng)免疫學(xué)或分子生物學(xué)病原檢測技術(shù)多數(shù)都開發(fā)成了商品化的試劑盒。近年來,根據(jù)目前國內(nèi)外研究的動(dòng)向,?隨著分子生物學(xué)技術(shù)在水產(chǎn)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，分子生物學(xué)技術(shù)已經(jīng)體現(xiàn)出極高的應(yīng)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。它對(duì)解決水產(chǎn)業(yè)的技術(shù)難題、開創(chuàng)新的領(lǐng)域、改造產(chǎn)業(yè)的傳統(tǒng)模式起著十分重要的作用。包括我國在

3、內(nèi)的許多國家都在大力研發(fā)與水產(chǎn)業(yè)有關(guān)的分子生物學(xué)技術(shù)，并著力于開發(fā)新的優(yōu)良養(yǎng)殖種類、培育高產(chǎn)抗逆的良種以及探尋檢測和防治病害的新技術(shù)、新方法等。因此應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行水產(chǎn)養(yǎng)殖品種的疾病診斷領(lǐng)域具有強(qiáng)大的發(fā)展?jié)摿?。目前生物技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖病原體檢測上的應(yīng)用?，我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)尤其是蝦類、貝類、魚類受到病原微生物的侵?jǐn)_十分嚴(yán)重，如何對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物疾病進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的預(yù)報(bào)與診斷，是擺在養(yǎng)殖業(yè)面前的第一道門坎。近些年來，生物技術(shù)的發(fā)展已為病原體的檢測提供了快速、高效、靈敏的技術(shù)手段。同時(shí)，免疫學(xué)快速診斷技術(shù)是一項(xiàng)特異、敏感和簡便的技術(shù)，廣泛應(yīng)用于許多領(lǐng)域，尤其在生物醫(yī)

4、學(xué)的理論研究和臨床診斷方面更是發(fā)揮了不可替代的作用。其主要包括血清凝集試驗(yàn)，免疫熒光抗體和免疫酶標(biāo)技術(shù)在水產(chǎn)動(dòng)物疾病診斷上的應(yīng)用具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定位準(zhǔn)確和應(yīng)用廣泛等優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)代生物技術(shù)結(jié)合免疫學(xué)5對(duì)免疫檢測技術(shù)、核酸檢測技術(shù)、核酸技術(shù)與免疫學(xué)相結(jié)合方法等進(jìn)行了研究與應(yīng)用。5單克隆抗體　　單克隆抗體是由單個(gè)細(xì)胞傳代所產(chǎn)生的高純度、高特異性的抗體。它與常規(guī)血清抗體相比，具有更強(qiáng)的特異性與針對(duì)性，且制備簡單，因而在病原檢測中得以廣泛應(yīng)用。80年代后期，已成功研制出傳染性胰腺壞死病毒、出血病毒等單克隆抗體，并用于魚類多種疾病的診斷。近年來。有學(xué)者已成功制備了

5、抗鰻弧菌的單抗和抗嗜水氣單胞菌的單抗。我國在單克隆抗體技術(shù)中，將其應(yīng)用于檢測草魚出血病毒和對(duì)蝦白斑病毒，均獲得了較為酶聯(lián)免疫吸附　　酶聯(lián)免疫吸附檢測(ELISA)是將抗原或抗體吸附在載體表面，通過酶與底物顯色來檢測特異性抗原或抗體的技術(shù)。該技術(shù)具有反應(yīng)迅速、特異性強(qiáng)、靈敏度高等特點(diǎn)。目前，ELISA在魚類病原體檢測上的應(yīng)用較廣，國內(nèi)諸多學(xué)者將此技術(shù)用于疾病檢測上，如李煥榮等(1997)應(yīng)用Dot－ELISA快速檢測出了嗜水氣單胞菌的致病因子胞外蛋白酶AhECPase54；黃?(1995)應(yīng)用單克隆抗體酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測到了對(duì)蝦皮下及造血組織壞死桿狀病毒；陳懷

6、青等(1993)應(yīng)用Dot－ELISA檢測到了魚類致病性嗜水氣單胞菌hec毒素。國外對(duì)此項(xiàng)技術(shù)的研究較國內(nèi)早，廣泛用于對(duì)癤瘡病、紅嘴病、細(xì)菌性腎臟病以及愛德華菌病等的快速檢測與診斷。此外，Noel等將ELISA用于菲律賓哈上，成功檢測出了弧菌PI滿意的效果。核酸探針　　核酸探針是指利用特定標(biāo)記的DNA或RNA探針與病原生物中的與探針互補(bǔ)的靶核苷酸序列進(jìn)行雜交，以此來確定宿主是否攜帶病毒的一類分子生物學(xué)技術(shù)。該方法以其靈敏度高、特異性強(qiáng)、簡便快速等特點(diǎn)，在病原檢測中倍受青睞。Futo，Hiney(1992)將此技術(shù)應(yīng)用診斷細(xì)菌性魚病，Comps等(1996)

7、采用地高辛標(biāo)記的RNA探針檢測FEV病毒在魚類中的表達(dá)，Bruce等(1994)利用DNA探針檢測對(duì)蝦桿狀病毒。日本學(xué)者也采用地高辛標(biāo)記的DNA探針進(jìn)行菌落雜交，用于鰻弧菌的鑒定。我國學(xué)者對(duì)導(dǎo)致我國對(duì)蝦大規(guī)模死亡的病原－皮下及造血組織壞死桿狀病毒(HHNBV)，已成功研制出核酸探針試劑盒，用于蝦病的診斷。該法簡便快捷，操作性強(qiáng)，已獲國家專利。聚合酶鏈反應(yīng)　　酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是指在引物的指導(dǎo)下，體外酶促反應(yīng)，迅速擴(kuò)增DN**段的一種方法。該法反應(yīng)十分迅速，幾小時(shí)內(nèi)便可擴(kuò)增到108－10倍，因而PCR技術(shù)具有高度的靈敏性。目前PCR在水產(chǎn)動(dòng)物病原的操作中

8、，已成功應(yīng)用于毛蛤甲肝病毒，對(duì)蝦桃拉病毒、的檢測白斑病毒等，并研制