淺談液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜

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1、淺談液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)劉謙保定出入境檢驗(yàn)檢疫局，保定071000摘要：液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜作為檢測(cè)系統(tǒng)，經(jīng)純化后的樣品在液相色譜和質(zhì)譜部分經(jīng)過分離和離子化，經(jīng)由檢測(cè)器得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢(shì)的互補(bǔ)，結(jié)合了色譜對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力和質(zhì)譜的高選擇性，高靈敏度及能夠提供相對(duì)分子量和結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)，在藥物分析，食品檢測(cè)等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。關(guān)鍵詞：液相色譜質(zhì)譜食品檢測(cè)高效液相色譜是一種準(zhǔn)確度高，分離范圍廣的快速分離方法，它對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)破壞性小，適合有機(jī)分子和生物分子的分離。質(zhì)譜具有其他分析方法無可比擬的靈敏度，對(duì)于未知

2、化合物的結(jié)構(gòu)分析定性十分準(zhǔn)確，對(duì)相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品要求也比較低。質(zhì)譜可以和氣相聯(lián)用如GC/MS,也可以和高效液相色譜聯(lián)用如HPLC/MS。由于色譜和質(zhì)譜靈敏度相當(dāng)，再加上分離效果很好的色譜可以作為質(zhì)譜的進(jìn)樣系統(tǒng)，質(zhì)譜作為色譜的鑒定儀速度快，分離好，應(yīng)用廣。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用成為最好的用于分析微量有機(jī)混合物的儀器。在1970年后，質(zhì)譜-質(zhì)譜法（massseparetion-massspectraCharacterization）迅猛發(fā)展起來。這種方法讓母離子進(jìn)一步裂解，從而獲得裂解過程和分子結(jié)構(gòu)的信息，通常我們稱為串聯(lián)質(zhì)譜，二維質(zhì)譜法，序貫質(zhì)譜等。我們知道，質(zhì)譜的分析建

3、立在物質(zhì)離子化的基礎(chǔ)上，按照荷質(zhì)比分離離子，通過測(cè)量離子譜峰的強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)分析目的。通過色譜純化后的樣品氣化離子化形成的離子在電場(chǎng)和磁場(chǎng)的綜合作用下，按照質(zhì)量數(shù)和電荷數(shù)的比值大小依次排列成譜被記錄下來。常見的質(zhì)譜圖的縱坐標(biāo)是離子信號(hào)強(qiáng)度，橫坐標(biāo)就是離子核質(zhì)比。在液相色譜質(zhì)譜中通常所用的離子源有ESI和APCI，我們常用的是ESI。ESI是比APCI軟電離程度較小的電離方式，應(yīng)用范圍較APCI的大，只有少部分有機(jī)分子ESI做不出，可以用APCI輔助解決問題。一般用ESI和APCI搭配使用比ESI和APCI的應(yīng)用范圍更廣一些。下面說一說ESI和API源的異同點(diǎn)?；瘜W(xué)源

4、項(xiàng)目ESIAPCI離子化過程樣品先帶電再噴霧，帶電液滴去溶劑化過程中形成帶電離子，是液相離子化樣品先形成霧再被電離，是氣相離子化適合檢測(cè)物質(zhì)適合檢測(cè)極性大，分子量大，不穩(wěn)定的分子，如蛋白質(zhì)，肽，糖適合極性小的樣品產(chǎn)生離子小分子產(chǎn)生單電荷離子，生物大分子產(chǎn)生多電荷離子主要產(chǎn)生單電荷離子ESI和APCI通常產(chǎn)生(M+H)+或(M-H)-等準(zhǔn)分子離子，源參數(shù)調(diào)整簡(jiǎn)單，容易使用，儀器靈敏度高。對(duì)APCI源來說，不足就是給出的結(jié)構(gòu)信息有限，樣品易發(fā)生熱裂解，低質(zhì)量時(shí)基線噪聲大。4ESI通常只產(chǎn)生分子離子峰，可以直接測(cè)定混合物，并可以測(cè)定熱不穩(wěn)定的極性化合物。其易形成多電

5、荷離子的特性可分析蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子；通過調(diào)節(jié)離子源電壓控制離子的碎裂（源內(nèi)CID）得到化合物的部分結(jié)構(gòu)。當(dāng)然有機(jī)質(zhì)譜也有自身局限性。有機(jī)分子多數(shù)有異構(gòu)體，而質(zhì)譜在立體化學(xué)方面區(qū)分能力差；色譜的重復(fù)性稍微差一些，需要嚴(yán)格控制操作條件，不能像NMR，IR等可以直接動(dòng)手操作，需要專人負(fù)責(zé)；質(zhì)譜有離子源的記憶效應(yīng)，操作起來也很復(fù)雜；盡管如此，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用在天然產(chǎn)物的分析〔1〕，藥物代謝結(jié)合物（如苯丙酮尿癥PKU）的測(cè)定〔2〕，藥物合成的監(jiān)測(cè)（如Ractopamine）〔3〕具有重要的應(yīng)用。美國(guó)耶魯大學(xué)教授J.Fenn等1984年首次發(fā)表ESI－MS的研究成

6、果，并于1988年成功地進(jìn)行了蛋白質(zhì)的分析。先天性疾病中有很大一部分是先天性遺傳代謝疾病，就目前醫(yī)學(xué)發(fā)展已經(jīng)了解的有一百多種。這些疾病雖不致死，但是對(duì)患兒的智力和體格可能造成癡呆、殘缺和畸形，是家庭、社會(huì)、國(guó)家的沉重負(fù)擔(dān)。目前有30多種代謝失常遺傳性疾病如各種氨基酸代謝失常血癥包括同構(gòu)胱氨酸尿癥、瓜氨酸血癥、酪氨酸血癥、超苯丙氨酸血癥、精氨酸酶缺乏癥、精氨琥珀酸尿癥和各種超甲硫氨酸血癥、短鏈和長(zhǎng)鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥(SCAD和LCAD)、異戊酸血癥、丙酸血癥、甲基丙二酸血癥、戊二酸血癥和其它各種有機(jī)酸代謝失常疾病等都可用LC/MS/MS進(jìn)行臨床檢測(cè)〔4〕。

7、我們知道，保證藥品質(zhì)量的一個(gè)重要方面是雜質(zhì)檢查及限度控制，使用LC/MS/MS可以很方便的對(duì)藥品進(jìn)行監(jiān)控。Nicolas建立了不同批次抗癌藥物DuP941的LC/MS/MS譜圖達(dá)到質(zhì)量控制目的；Rourick建立了鑒定藥品雜質(zhì)的方法，利用LC/MS/MS功能鑒定頭孢羥氨芐降解產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)。對(duì)分析化學(xué)家來說是一個(gè)挑戰(zhàn)的體內(nèi)藥物分析利用LC/MS/MS也顯示很大的優(yōu)越性。有報(bào)道Takeshi對(duì)血液和尿液中11個(gè)添加的吩噻嗪類藥物進(jìn)行分析，采用SPME和LC分離經(jīng)MS/MS檢測(cè)。Wong開展了微透析-LC/MS/MS生物活體分析，將微透析探針插入動(dòng)物的頸動(dòng)脈，實(shí)時(shí)了解

8、松果體素在體內(nèi)的生化過程和代謝情況。L