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《安捷倫液相常見問題》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、HPLC故障排除癥狀類型可能的原因解決方案基線噪聲大隨機(jī)性-污染物積聚沖洗柱;凈化樣品;使用HPLC級(jí)溶劑連續(xù)性-檢測(cè)器燈故障更換紫外燈(壽命為1000小時(shí))偶然性-外部電氣干擾使用LC系統(tǒng)專用穩(wěn)壓器樣品量過大進(jìn)樣量應(yīng)為流動(dòng)相進(jìn)樣量的1/6雙峰樣品量過大進(jìn)樣量應(yīng)為流動(dòng)相進(jìn)樣量的1/6進(jìn)樣溶劑過強(qiáng)使用較弱的進(jìn)樣溶劑或流動(dòng)相濾芯堵塞更換并使用0.5μm孔隙率的在線過濾器柱有空隙或氣溝用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱進(jìn)樣器流路不通暢更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子柱頭有空隙使用填料或玻璃珠填充柱頂部柱上樣品超載使用更高負(fù)載量的固定相;增加色譜柱內(nèi)徑;減少樣品量單峰-存
2、在干擾性組分凈化樣品;預(yù)分離拖尾峰開始出雙峰請(qǐng)參見雙峰存在未掃的死體積減少接頭的數(shù)量;確保進(jìn)樣器密封墊緊密;確保接頭正確固定堿性化合物-硅醇相互作用換成聚合物固定相堿性物質(zhì)-硅醇相互作用使用更強(qiáng)的流動(dòng)相或添加競(jìng)爭(zhēng)堿(例如,三甲胺)硅膠基-柱降解使用特種色譜柱;聚合物柱或空間位阻峰展寬進(jìn)樣量過大降低進(jìn)樣溶劑的強(qiáng)度以集中溶質(zhì)進(jìn)樣閥中的峰擴(kuò)散在進(jìn)樣前/后引入氣泡以減少擴(kuò)散數(shù)據(jù)系統(tǒng)的采樣速率過低增大采樣檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)低調(diào)節(jié)時(shí)間常數(shù)使之與峰寬匹配流動(dòng)相粘度過高提高柱溫檢測(cè)器流通池容積過大使用盡可能小的池容積(系統(tǒng)中無熱交換器)注射器體積過大減少進(jìn)樣量保
3、留時(shí)間長(zhǎng)使用梯度洗脫或較強(qiáng)的流動(dòng)相壓力波動(dòng)單向閥泄漏更換單向閥泵密封墊泄漏更換泵密封墊微粒積聚過濾樣品；在線過濾器;過濾流動(dòng)相壓力漸增微粒積聚過濾樣品；在線過濾器;過濾流動(dòng)相水/有機(jī)系統(tǒng)-緩沖液沉淀測(cè)試緩沖液-有機(jī)混合物;確保兼容性保留時(shí)間超出總滲透體積體積排阻-特異性相互作用添加流動(dòng)相改性劑或更改溶劑保留時(shí)間不斷變動(dòng)柱溫不斷變化使柱恒溫;絕緣;保證實(shí)驗(yàn)室溫度恒定平衡時(shí)間不足以適應(yīng)梯度洗脫要求,或梯度洗脫流動(dòng)相起變化確信在溶劑改變或梯度結(jié)束后至少10個(gè)柱容積通過色譜柱流動(dòng)相組分選擇性蒸發(fā)減少氦氣的劇烈脫氣;保持溶劑貯器蓋好;制備新的流動(dòng)相緩沖
4、能力不足用>20mM濃度的緩沖液在線流動(dòng)相混合不一致保證梯度系統(tǒng)輸送恒定組成;與手動(dòng)制備流動(dòng)相核對(duì)污染積聚沖洗色譜柱以去除污染物最初幾次進(jìn)樣-吸附在活性部位用濃樣品進(jìn)樣沖洗柱,使其處于正常狀態(tài)保留時(shí)間逐漸縮短流速在增加檢查泵以確保正確;否則需重調(diào)柱上進(jìn)樣超載減少樣品鍵合固定相的流失保持流動(dòng)相pH值在2-8.5間保留時(shí)間逐漸增加流速在減慢解決液流中的漏液現(xiàn)象,更換泵密封墊,檢查泵的渦流和氣泡硅膠填料的活化點(diǎn)使用流動(dòng)相改性劑鍵合固定相的流失保持流動(dòng)相pH值在2-8.5間流動(dòng)相組成在變化確保流動(dòng)相容器蓋好硅膠填料的活化點(diǎn)流動(dòng)相中加競(jìng)爭(zhēng)堿硅膠填料的活
5、化點(diǎn)固定相用更高覆蓋度的填充料靈敏度問題峰位于檢測(cè)器線性范圍之外稀釋或濃縮使之處于線性區(qū)內(nèi)最初幾次進(jìn)樣-樣品在樣品池或柱中被吸附;自動(dòng)進(jìn)樣器;流路阻塞用濃樣品處理樣品池/柱自動(dòng)進(jìn)樣器流路阻塞檢查流量情況,確保無阻塞現(xiàn)象進(jìn)樣器樣品定量管未充滿確保樣品池中已充滿樣品在樣品制品時(shí)有關(guān)的樣品流失用內(nèi)標(biāo)法在制備樣品,優(yōu)化樣品制備方法柱平衡時(shí)間減慢（離子對(duì)現(xiàn)象）長(zhǎng)鏈離子對(duì)試劑平衡時(shí)間慢使用較短的烷鏈試劑1.常見色譜故障——壓力波動(dòng)可能原因：溶劑進(jìn)口過濾芯堵塞；溶劑未脫氣；泵的密封墊老化；出口單向閥失效；主動(dòng)閥失效。最常見原因：泵內(nèi)有氣泡2.常見色譜故障—
6、—壓力過低可能原因：溶劑進(jìn)口過濾芯堵塞；連接管路泄漏或其它備件（泵頭密封墊）；溶劑或流速改變；主動(dòng)閥失靈；四元比例閥失靈；單向出口閥失靈；色譜柱失效（固定相流失）。3.常見色譜故障——壓力過高可能原因：柱子進(jìn)口過濾芯被污染；PURGE（排氣）閥過濾芯被污染；色譜柱被污染；連接管路，尤其是針座毛細(xì)管堵塞；進(jìn)樣器旋轉(zhuǎn)密封閥被堵塞；進(jìn)樣針或針座被阻塞4.常見色譜故障——基線噪音是—檢測(cè)器？基線噪音——停泵——噪音是否依然存在---否—泵或流動(dòng)相？其它要考慮的問題：是否改變了流動(dòng)相的組成？是否改變了檢測(cè)波長(zhǎng)？在你的儀器上使用的最后的流動(dòng)相是什么？流動(dòng)
7、相是否相溶？流動(dòng)相是否干凈？如何排除流動(dòng)相中的氣泡？如何排出流動(dòng)池中的氣泡？避免流動(dòng)相中產(chǎn)生氣泡的最佳方式是將流動(dòng)相經(jīng)脫氣裝置進(jìn)行脫氣。如果沒有脫氣裝置，則可以在流動(dòng)相溶劑瓶中通入氦氣進(jìn)行脫氣。也可以在檢測(cè)器的出口端加一根細(xì)管線以調(diào)節(jié)流動(dòng)池中的背壓，但必須注意不要超過流動(dòng)池的最大壓力，否則會(huì)造成流動(dòng)池漏液或流動(dòng)池?fù)p壞。如果流動(dòng)池中出現(xiàn)氣泡，則先摘下色譜柱，用一根管線直接將流動(dòng)相接入檢測(cè)器的入口。將異丙醇以較大的流速注入流動(dòng)池。直到基線上看不到毛刺為止。氣泡就應(yīng)該清除掉了。如何減少基線噪音？無規(guī)律噪音可能與污染有關(guān)。請(qǐng)沖洗色譜柱，對(duì)樣品做合適的
8、前處理以避免污染，并使用HPLC級(jí)別的溶劑。連續(xù)噪音有可能由檢測(cè)器或泵造成。要確定問題是否發(fā)生在檢測(cè)器還是在泵，請(qǐng)先關(guān)泵停掉流量，監(jiān)測(cè)基線。如果此時(shí)基線平穩(wěn)，則噪音
