茶多酚大孔樹脂吸附分離性能的研究

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1、茶多酚大孔樹脂吸附分離性能的研究1材料與儀器1.1材料：茶葉(有限公司)(經(jīng)西北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物教研室鑒定);1.2試劑及藥品：茶多酚對照品(批號：，中國藥品生物制品檢定所提供);大孔樹脂LX-X由西安藍曉科技開發(fā)有限公司提供。其它試劑均為分析純。1.3儀器：島津LC-20A型高效液相色譜系統(tǒng)：包括LC-20A型高壓恒流泵、SPD-20A檢測器和LCSolution工作站；UV-762紫外可見分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司);電熱恒溫水浴鍋(H·H·S21-6C，上海醫(yī)療器械五廠);電子分析天平(FC204，上海精科實業(yè)有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器R502B(上海亞蓉生化儀

2、器廠);SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵；索式提取器；電熱鼓風(fēng)干燥箱;植物粉碎機(FZ102，天津市泰斯特儀器有限公司)；層析柱(40mm×50cm)。2方法2.1茶多酚的定性、定量檢測2.1.1茶多酚的薄層定性檢測硅膠薄板制作按1：3的比例稱取硅膠G和0.5%的CMC-NA，研磨約30min后，平鋪到10×20cm的洗凈烘干的玻璃平板上，鋪勻，隔夜，自然晾干。展開劑配制按氯仿：乙酸乙酯：正丁醇：甲酸=2：1.3：0.4：0.3的比例配置（約需80ml）層析活化薄板：105℃，30min。點樣：所用液體為留取的待測液，點樣量為25uL。飽和：在層析缸內(nèi)扣放入一培養(yǎng)皿，再將薄板放在

3、上面,板子不接觸層析液，在其蒸汽中飽和30min以上。層析：將板子放入展開劑中展開，待展開劑前沿距板子上端1.5cm取出，放入通風(fēng)廚晾干。結(jié)果觀察及分析:（肉眼觀察）2.1.2茶多酚的定量測定—酒石酸亞鐵分光光度法1利用茶葉中的多酚類物質(zhì)能與亞鐵離子形成藍色絡(luò)合物的性質(zhì)，將茶葉水提液及樹脂法、有機溶劑法所得產(chǎn)品配制成一定濃度的溶液，使其與酒石酸亞鐵溶液在一定的介質(zhì)條件中反應(yīng)生成藍色絡(luò)合物，通過測定絡(luò)合物的吸光光度值，利用公式便可以算出茶葉及各產(chǎn)品中茶多分的含量。儀器及用具實驗室常規(guī)儀器及感量0.0001的分析天平、分光光度計2.1.2.1試劑和溶液1）酒石酸亞鐵溶液：準確稱量0

4、.500克硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O）和2.500g酒石酸鉀鈉（C4H4O6KNa·4H2O），用水溶解并定容至500ml。（溶液低溫、避光保存，有效期一個月）2）PH=7.5的磷酸鹽緩沖液1/15M磷酸氫二鈉：稱取11.6885g磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O），用水溶解并定溶至500ml。1/15M磷酸二氫鉀：稱取4.5390g磷酸二氫鉀（KH2PO4·12H2O），用水溶解并定溶至500ml。取上述1/5磷酸氫二鈉溶液85ml和1/15M磷酸二氫鉀溶液15ml，混勻即可。2.1.2.2操作方法試樣制備：稱取3g茶葉，研碎后，將其放置于500ml的錐形瓶中，加沸

5、蒸餾水450ml，立即移入沸水浴中，浸提45min，浸提完畢后立即趁熱減壓過濾，濾液移入500ml容量瓶中，殘渣用少量熱蒸餾水洗滌2～3次，并將濾液移入上述容量瓶中，冷卻后用蒸餾水稀釋至刻度。稱取多酚產(chǎn)品各0.025g，用甲醇溶解并定容至25ml，溶液濃度為0.1%。測定步驟：a.吸取上述試樣液各1ml，分別加入已標號的25ml容量瓶中，然后各加入4ml水，5ml酒石酸亞鐵溶液，充分混勻后用PH=7.5磷酸鹽緩沖液定溶至計刻度線。b.不加試樣液，配制試劑空白溶液，以作參考。c.用10ml比色杯，在波長540nm處測定各溶液的吸光度A。測定結(jié)果如表1：2.1.2.3結(jié)果計算茶葉及

6、茶多酚產(chǎn)品中的茶多酚含量，以干物質(zhì)量百分率表示：計算公式為：A×1.957×2×L1茶多酚（%）=───────────×1001000×L2×M×m其中：L1——試劑的總量（ml）L2——測定時用液量（ml）M——試樣的質(zhì)量(g)m——試樣干物質(zhì)含量百分率（%）A——試樣的吸光度1.957——用10mm比色杯，當吸光度等于0.50時，每毫升茶湯中茶多酚相當于1.957mg。0.239×1.957×2×25茶多酚產(chǎn)品（%）=───────────×100%=93.54%1000×1×0.0252.1.2.4結(jié)果討論2.1.3茶多酚的定量測定—酒石酸亞鐵分光光度法21原理利用茶葉

7、中的多酚類物質(zhì)能與亞鐵離子形成藍色絡(luò)合物的性質(zhì)，將茶葉水提液及三種提取法所得的產(chǎn)品配制成一定濃度的溶液，使其與酒石酸亞鐵溶液在一定的介質(zhì)條件中反應(yīng)生成藍色絡(luò)合物。通過測定此絡(luò)合物的吸光度值，利用由沒食子酸乙醋作為對照品制作的標準曲線便可計算出茶葉及各產(chǎn)品中茶多酚的含量。根據(jù)茶多酚主要成份是表兒茶素和表沒食子兒茶素類。兒茶素結(jié)構(gòu)的羥基在苯核上的位置不同，既有鄰苯二酚基，又有連苯三酚基，還有沒食子酸形成酯型結(jié)合物。而酒石酸亞鐵主要是與茶多酚中的鄰位羥基和連位羥基功能團顯色，而對間位羥基和單羥基不