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1、植物組織蛋白質(zhì)提取方法1、植物組織蛋白質(zhì)提取方法1、根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時(shí)）。3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，樣品制備完成。蛋白質(zhì)提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g這種方法針對(duì)SD
2、S-PAGE，垂直板電泳！?2、植物組織蛋白質(zhì)提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨葉片2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過(guò)夜，然后離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)）棄上清。3、加入等體積的冰浴丙酮（含0.07%的β-巰基乙醇），搖勻后離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)），然后真空干燥沉淀，備用。4、上樣前加入裂解液，室溫放置30分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離心（15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以沒(méi)有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)），可臨時(shí)保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白，然后
3、可分裝放入-80℃?zhèn)溆?。藥品：提取液：?0%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中（終體積為5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。這種方法針對(duì)雙向電泳，雜質(zhì)少，離子濃度小的特點(diǎn)！當(dāng)然單向電泳也同樣適用，只是電泳的條帶會(huì)減少！?3、組織：腸黏膜目的：WESTERNBLOT檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)應(yīng)用TRIPURE提取蛋白質(zhì)步驟：含蛋白質(zhì)上清液中加入異丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒轉(zhuǎn)混勻，置室溫10min離心：12000
4、g，10min，4度，棄上清加入0.3M鹽酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振蕩，置室溫20min離心：7500g，5min，4度，棄上清重復(fù)0.3M鹽酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振蕩混勻，置室溫20min離心：7500g，5min，4度，棄上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀離心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERNBLOT）存在的問(wèn)題：加入1％SDS后沉淀不溶解，還是很大的一塊，4度離心后又多了白色沉定，SDS結(jié)晶？測(cè)濃度，含
5、量才1mg/ml左右。解決：提蛋白試劑盒，另外組織大小適中，要碎，立即加2XBUFFER，然后煮5－10分鐘，效果很好的。?4、植物材料：水稻苗，葉鞘，根1、200毫克樣品置于冰上磨碎2、加lysisbuffer，離心，10000rpm，4度，5min取上清3、重復(fù)離心5minlysisbuffer：urea??np-40?ampholine2-me?pvp-40?5、蛋白質(zhì)樣品制備秧苗蛋白質(zhì)樣品的提取按Davermal等（1986）的方法進(jìn)行。100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及
6、少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5ml10%三氯乙酸（丙酮配制，含10mM即0.07%β-巰基乙醇），混勻，-20℃沉淀1小時(shí)，4℃，15000r/min離心15min，棄上清，沉淀復(fù)溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巰基乙醇)，再于-20℃沉淀1小時(shí)，同上離心棄上清，（有必要再用80％丙酮(含10mMβ-巰基乙醇所得沉淀低溫冷凍真空抽干。按每mg干粉加入20μl（可調(diào)）UKS液[9.5M尿素，5mM碳酸鉀，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫蘇糖醇)，2%Ampholine(AmershamPhar
7、maciaBiotechInc，pH3.5-10)，6%TritonX-100]，37℃溫育30min，期間攪動(dòng)幾次，28度（溫度低，高濃度的尿素會(huì)讓溶液結(jié)冰）16000r/min離心15min，離心力越大時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)越好！上清即可上樣電泳?；蛘?70度保存?6、植物根中蛋白質(zhì)的抽取(1)sample,液氮研磨(2)裝1.5mlcentrifuge用tube(3)加1MKH2PO4+K2HPO4700ul(4)12000rpm,4度,10-15minite(5)取上層液，蛋白質(zhì)就在里面
