用固相萃取和高效液相色譜法測定煙草中糖的研究.

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1、用固相萃取和高效液相色譜法測定煙草中糖的研究.用固相萃取和高效液相色譜法測定煙草中糖的研究.　　摘要本文研究了用固相萃取和高效液相色譜法測定煙草中糖的方法。煙草中的糖用水超聲震蕩浸??；然后用WatersSep-pakC18固相萃取小柱預分離，以WatersCarbohy-drate糖分析柱為固定相分離，75%乙腈為流動相分離，示差折光檢測器檢測測定。方法用于幾種煙草樣品中糖含量的測定，結果令人滿意。關鍵詞高效液相色譜法糖煙草1引言煙草中的水溶性糖主要有葡萄糖、果糖、蔗糖、半乳糖和麥芽糖等，它們是影響煙草吸味的最重要化學成

2、分之一[1,2]，目前煙草中的糖的測定方法主要有氧化還原滴定法，分光光度法，連續(xù)流動分析和高效液相色譜法等[3]。但是氧化還原滴定法和分光光度法只能測糖的總量。液相色譜法是較可靠的糖測定方法，我們曾研究過用WatersSugar-Pak-1糖分析柱測定煙草中的糖，但蔗糖和麥芽糖不能完全分離[4]。本實驗研究了用WatersCarbo-hydrate糖分析柱分離測定了煙草樣品中的葡萄糖、果糖、蔗糖、半乳糖和麥芽糖，五種糖均能達到基線分離。并建立了用水超聲浸取，固相萃取預分離的樣品前處理方法，獲得了滿意結果。2實驗部分2.1

3、主要儀器和試劑美國安捷倫公司高效液相色譜儀，HP1100四元泵，HP1100自動進樣器，HP1100示差折光檢測器和色譜工作站；色譜純乙腈；蔗糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、果糖標準。2.2色譜條件色譜柱：WatersCarbohydrate色譜柱；流動相為75%乙腈，流速為1.5ml/min；柱溫35℃；進樣量20μL。2.3樣品處理準確稱取煙草樣品約0.500克，用50mL水在40-50℃下超聲萃取30min，過濾，棄去最初的約10mL濾液，收集后面的濾液。取5mL通過預活化好的Sep-PakC18固相萃取小柱，棄去最初

4、的2mL，收集后面的3mL用4.5μm濾膜過濾，取20μL進樣分析；在該條件下，標樣和煙草樣品的色譜圖見圖-1。 　　3結果與討論3.1檢測器的選擇由于待測定物在紫外光區(qū)無吸收，而且待測物在樣品中的含量較高，故選用示差折光檢測器檢測。3.2流動相和柱溫的選擇WatersCarbohydrate鈣型陽離子交換柱為分離糖和多羥基化合物專用柱，該柱用75%的乙腈水溶液作流動相，柱溫要求控制在℃之間，實驗選用柱溫為35℃。3.3樣品前處理煙草樣品中的糖一般按文獻[3]的方法用80%乙醇提取，該方法需用醋酸鉛沉淀單寧，蛋白質等干擾

5、物，過量的鉛還需用草酸鉀除去，操作麻煩。我們試驗了新的樣品前處理方法，由于待測的幾種糖都易溶于水，所以實驗選用水為提取劑。試驗了振蕩浸取和超聲浸取對糖提取率的影響，在相同時間內超聲浸取溶出率明顯高于振蕩浸取，故實驗選用超聲浸取，室溫下糖溶出慢，升高溫度可加速糖的溶出，但溫度過高會加快蔗糖和麥芽糖水解，使蔗糖和麥芽糖回收率偏低，且葡萄糖，果糖回收率偏高；故實驗選擇浸取溫度為40～50℃，在該溫度下超聲浸取25min以上可使糖完全溶出，故實驗選用超聲浸取30min。糖提取液應在最好當天測定，如放置過夜會因多糖水解導致葡萄糖測

6、定結果稍有偏高。煙草樣品提取液中除了糖外，還含有少量其它成分，如單寧、多酚、蛋白質、油脂等。這些物質易腐蝕色譜柱且影響分離，所以在進樣之前要預分離這些成分。我們采用Sep-PakC18固相萃取小柱預分離單寧、多酚、蛋白質、油脂等成分。用WatersSPE真空提取裝置，每次可同時處理20個樣，小柱活化和樣品富集的流速均為10ml/min，小柱用5ml乙醇浸潤，再用10ml水洗去乙醇，樣品以10ml/min的流速通過小柱，棄去最初的2ml，收集后面的3ml用4.5μm濾膜過濾，取20μl進樣分析，這樣可有效地除去單寧、多酚、

7、蛋白質、油脂等水難溶成分和顆粒成分。3.4回歸方程、相關系數(shù)及檢測限分別配制濃度約為5mg/ml，lmg/ml，0.2mg/ml，0.04mg/ml的標準溶液，進樣后計算出不同濃度的峰面積，計算出回歸方程?；貧w方程為見表1。根表1回歸方程、相關系數(shù)及檢測限組分 　　據(jù)信燥比S/N=3，測得個組分最低檢測濃度，結果見表1。表2方法精密度及回收率 　　2.5回收率實驗及精密度取煙草樣品按本文2.3處理，在相同色譜條件下測定5，結果見表22.6樣品分析及結果用本方法測定了六種煙草樣品中的糖，各糖回收率在98-102%之間，相對

8、標準偏差在0.55-0.82%之間。結果令人滿意。4結論本方法用WatersCarbohydrate色譜柱高效液相色譜法測定煙草樣品中的糖，并用水超聲浸取提取樣品中的糖，方法簡便快速，結果可靠，樣品可實現(xiàn)批量處理，可滿足大量樣品分析的要求，提高了工作效率。參考文獻：1金聞博，戴亞編著.煙草化學.XX：清華大學出版社，